在双酶-化学联合法合成三氣蔗糖中，最值得关注的是优化G- 6 - a的发 酵条件以及改善糖和糖酯的分离技术，这将有助于提高该法的效率，因此，需要 对G-6 - a形成过程中的生物化学和生理学机制进行详细的研究以简化该操作。 而快速分析、良好的反应控制以及适时地终止反应，也是双酶-化学联合法合成 三氣庶糖所必需的。同时，以蔗糖为原料经微生物发酵作用，直接生成S-6-a 的方法相当诱人，在这方面值得花大力气加以研究。
Hodge等人在大U形口袋区发现5种糖苷，即甘草甜素、柚背二氢査尔酮、 甜菊苷、新橙皮苷二氢查尔酮和Osladin等。它们含有多个AH、B单元，呈U 形三级结构，U字中部为疏水骨架，如图1-25所示。其抑制剂Gymnema具有 相同的骨架，但其上的6个一OH全被酯化，这表明甜受体也有与此互补的 穴位。甜分子中疏水侧链的长度与甜度有关，侧链的空间要求取决于其结合的 部位，故各甜味化合物的侧链长度限度也可作为研究受体的有利探针。应指 出的是最强刺激是针对脂膜的烃链C~9前段，故有刚性（：9疏水链的化合物 最甜。
1.常规毒理学和致癌性分析分别在试验动物大鼠、小鼠和狗的食物中添加不同剂量的纽甜做亚慢性和慢 性饲养试验来评估纽甜的安全性。评价的指标有临床观察、体检、体重、体重的 增加、食物和水的消耗里、血液学、临床生化、尿检和眼科检查。此外，还对狗
挤杻膨胀淀粉时对甜菊苷的转葡糖基得率的影响。酶萤低于900U/g挤IK膨胀淀粉 时，转葡糖基得率随酶摄增加而增加；大于900U/g时，得宇?保持恒定，而环糊 精随酶1：增加反而减少。由于环糊精葡糖基转移酶萤过多会引起一些副反应，如 环糊精水解或歧化反应，而不会增加甜菊苷的转葡糖基得率，因此最佳环糊精葡 糖基转移酶镦为900U/g挤汛膨胀淀粉左右。
大多数转葡糖基反应采用均匀酶反应体系，以可溶性淀粉或环糊精作为 葡糖基供体，葡糖基供体、受体均在溶液中，因此产物分离困难，并且反府 生成大童非目的还原糖。若以不溶的原淀粉为葡糖基供体，利用残留淀粉的 不溶性可以简化产物分离纯化工序，但原淀粉具有紧密的晶体结构，W此转 葡糖基反应速率和得率都很低。对原淀粉经挤压膨化处理后能以溶胀状态息 浮在水中，得到的反应体系与原淀粉相似，但反应速字和得率都比原淀粉反
四、其他基因工程法生产莫奈林
(一）甜菊苷的提取与精制用水提取通常选用干甜菊叶为原料采用连续提取法。欧洲一篇专利认为在 90 ~110弋之间对甜叶菊叶子进行预热处理可去除一些不受欢迎的甜味杂质，同 时还指出这过程最好在空气流、惰性气体或水蒸气中进行。还有一种去除甜味杂 质的方法是在25 ~59t的水中或丨0T以下的乙酸乙酯、二皤烷、二氣化烷、四 氢呋喃或1, 2-二氣乙烷类有机溶剂中提取。有人认为往浸出液中添加些正磷 酸盐、氢氧化钡或硫酸钡等，有利于下一道过滤工序的顺利进行。虽然日本 Stevia公司认为在100弋热水中提取也可去除甜味杂质，但他们没有说明如何从 残余的叶子中提取出残留的双萜苷。
(五）脱乙酰基反应条件的优化
