最近，研究人员还发现了一种NAS的同种异型物一NAS-2。仙茅蛋白2 的cDNA已克隆，其核苷酸序列也被测定。尽管，仙茅蛋白2的推测氨基酸序列 与NAS的相同，研究人员发现两者的核苷酸仍存在一个不同之处。Maiko Suzuki 等尝试了在￡：.co/i中表达重组仙茅蛋白1 (过去被认为是Cimnilin)和仙茅蛋白 2。仙茅蛋白1和仙茅蛋白2分别在E. coli中表达，然后用氧化重折叠方法重新 组合，从而获得仙茅蛋白的二聚体。可是，无论是仙茅蛋白1的同型二聚体 (仙茅蛋白丨-1)还是CurcuUd的同型二聚体（仙茅蛋白2-2),都未能引起 甜味，也未能起味道修饰作用。
(-)莫奈林在大肠杆菌中的表达
Winnig等对识别lacUsole的分子基础进行了更为深入的完善。通过对特定受 体突变体的功能分析，他们发现小鼠WR3的第五个TM呎域的突变V738A足以 使小鼠甜味受体获得lactisole敏感件，尽管这一受体突变体的敏感性要比人体甜 味受体的低。另外，通过小鼠T1R3的突变K735F，可得到一个与人体受体具有 相同丨actisole敏感性的小鼠甜味受体。所有以前的资料均表明，甜味受体的 T1R3原体的TM K域中有真正的第四个部位。图1 -34描述了受体T1R2-T1R3 上的四个结合部位。
Pentadin 是从非洲 Pentadiplandraceae 植物 Pentadiplandra brazzeana Baillon 果 实中提取出的一种甜蛋A,可使用水法提取，经超滤浓缩后进行凝胶过滤分离精 制。Pentadin相对分子质最约为12000，甜度是蔗糖的500倍。以猴为对象，相 比于0. 02%的嗦吗甜和莫奈林，0. 1% Pentadin的甜味刺激来得快，消失得也快。 它和Brazzein来自同一种植物，前者是果实经热干燥后提取，而后者是从鲜果中 提取。Pentadin是非天然形态的交联的Brazzein分子，分子质量约是Brazzein的2 倍，且甜度明显比Brazzein低。
第二章L真箝甜味敗一份番茄汁代谢所产生的甲醇大约是用100%纽甜增甜的等萤饮料所产生的甲醇 的200倍。因此，可以认为纽甜是安全的。
有别于其他C族G蛋A偶联受体的是，甜味受体为异型二聚体。一些研究 人员猜测，TIRs (特别是T1R3)很有可能就是甜味受体，并且可能像其他C族 G蛋白偶联受体一样形成同型二聚体。但是，几个月后，Li等便证明了只有异型 二聚体T1H2 -T1R3才具有甜味受体的功能。T1R3的序列有20%与mGluRs的 相同。在人们发现甜味受体的时期，mGluR8是惟一一种结构已被人们至少部分 了解了的C族G蛋白偶联受体。正是人们对mGluRlN端结构的了解，促成了首 个甜味受体同源模型的建立。类似于mGhiRl，这个模型为两条T1R3链的同型 二聚体。不久后，—个类似的模型表明，T1R3的活性位点可以容纳三个甜度极 高的小分子质量分子。
(二）利用半乳糖苷酶改性甜叶悬钩子苷
由于到B前为止，还没有冇关奇异果素原子水平结构方面的资料，为了更好 地研究奇异果素的甜味，Antone丨la Paladino等预测了奇异果素的三维结构并应用 比较建模与分子对接技术模拟了奇异果素的二聚体和四聚体形态。
过在60弋保持lOmin，然后在4t、pH4.5条件下保持lh,可得接近单一组分的 莫奈林（经SDS - PAGE测定）。通过离子交换柱可进一步纯化，得率约为 100mg/10g湿酵母（700mg可溶蛋白〉。提纯得到的萸奈林与天然莫奈林甜度一 样，阈值丨网，通过CD光谱分析比较重组莫奈林和天然莫奈林的二级结构单 元，因此可以预料两者必然有相同的三级结构。
细胞提取物经离心、溶解后进行分析。酵母的非水溶性组分经SDS凝胶电 泳发现存在分子质量为23000jjl的蛋白质，即嗦吗甜分子，而对照样不产生类嗦 吗甜蛋内质。
