Oshimn等人在混合液中，用平均尺寸3.4JJLIT1 x9.5m.iti的固体嗜热菌蛋白酶 催化合成Z-A.sP-PheOMe。该混合液组成为乙酸乙酯、苯、甲醉和水，其比例 为50:29:19:2。该方法的主要优点是由于单位体积的酶更多，因而反应器容积 比固定化酶反应系统的小；并由于只有在固体表面的酶分子起作用，因此粒子内 扩散对反应速率的影响可忽略不计。但也存在一个缺点，W为所用固体酶的体积 很小，因此连续反应时，压差很大。
纽甜是[/V- (3, 3-二甲基丁基）-L-cr-天冬氨酰基]-L-苯丙 氨酸-1-甲酯的俗称，其分子结构如图2-35所示。它的分子式C^HwI^Os， 相对分子质量 378.47，其中 C 63. 4%，H 7. 99%，N 7. 40% , 0 21. 14%。如图
毒性试验中也出现了唯一与纽甜有关的可逆转的临床生化变化，在给兔、狗 做为期13周剂量为0.6g/(kg_d)和为期一年剂鱼为0.8g/(kg ? d)的试验时， 出现了特异的肝脏碱性磷酸酶升高（4~5倍于对照组）。其他肝功能试验（如天 冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、谷氨酰转移酶和总胆色素）都没有改变，也没 有肝、胆道、胃肠道或骨的组织病理学发现。动物的单一碱性磷酸酶活性可以在 没有任何病变的基础上升高，是一种生理的适应，尤其是当环境改变时，并不是 添加纽甜所特有的。有试验也显示出人在食用13周纽甜以后没有出现碱性磷酸 酶和其他肝功能试验的改变。这表明在给予数千倍于预测消耗剂量的纽甜，在 兔、狗身上所观察到的可逆转的种系特异的血浆碱性磷酸酶活性升髙现象，是一 种非特异性的生理反应而不是毒性作用。
图6 - 17 25弋时甜蜜紊水溶液的相对黏度与浓度的关系曲线
用在非水溶性有机溶剂中的闶定化酶催化反应是二相反应体系的-个特例。 在该系统中，多孔载体内部空隙中的缓冲液和在载体外的有机溶剂组成r二相体 系。由于在载体内部的水相体积比有机相体积小，因此由式（2-17)知能增加 平衡常数。5.其他方法
当单糖专一性果糖转移酶以固定化酶的形式使用时，尽管此时酶的活力只有 自由状态下的80% ,但固定化酶的使用却可以防止酶制剂对产物S -6 - a造成的 污染，实现酶的蒉复利用。更为重要的是，它还可以将S-6-a的得率提高到 80%左右。此外，提高单糖专一性果糖转移酶的浓度，还可以使反应时间降低 到5h。
其中，TpTpCpGpApC 部分是Asp-Phe 的密码子，磷酸化后2个核苷酸链以部 分重香模式进行融合，形成较长的双链 DNA分子（图2-28)。该DNA分子有 重复序列和缺口，缺丨〗经T4DNA连接 酶融合形成带2 ~ 500个含12个核苷酸 的基本单元的连续共价结构，然后用限 制性内切酶Taq该融合的质粒在50代内保持稳定，双链DNA在插人点上游有可控的色氨 酸启动子（丨rpE基因），将融合的质粒转移到大肠杆菌K12 HB101，在后动子
然而，将之作为甜味与甜味剂理论一种极有效素材的研究工作仍在进行之 中，因为自然界中具有变味作用的天然化合物中只有奇异果素这一种效果最明 显，研究文献也比较多。奇异果素糖蛋白分子中所隐含的神秘变味机理，仍呼唤
蛋白质甜味化合物屈于髙分子的天然聚合物，与本书其余各章讨论的低分子 化合物明显不同。甜蛋白质的一个共同特点就是甜味刺激来得慢，消失得也慢， 甜味持续时间长，味觉延绵。关于甜蛋白的生甜机理及甜味与结构相互关系的基 础理论，目前尚存在很多疑难之处，正吸引着众多不懈的研究者去努力攻克。有 鉴于此，虽然甜蛋A莫奈林有来源植物繁殖难、提取成本髙、甜味特性欠佳、缺 乏毒理数据等众多不足之处而难以推广应用，但考虑到它具有重要的学术研究价 值，本章以相当的苡幅详细讨论。而能使酸味变甜味，号称为“奇异果素”的 糖蛋白Miraculin，包含在分子之中的深奥变味机理，更是摆在科学T作者面前的 一大难题。虽然Miraculin由于安全毒理问题而中断了其产业化进程，考虑到它 的学术价值，在本章中也做较详细的讨论。
