m5-14 质粒 pCLRE2、pCLRE4 示意图 注：缩写同阁5-1U 另有：N=AtoI ； Sp = ?辦 I ； Bg = Bgl\i0
三、阿力甜的化学合成技术阿力甜的化学合成可以分为三步，首先是2, 2, 4，4-四甲基-3-硫化三 亚甲基氨的合成。在冰水浴条件下，将二氣化硫缓慢加人到二异丙基甲酮中，反 应温度不超过30弋。当反应生成的HC1开始减少时，再反应30min后终止反应， HC1用真空泵抽出。这一步亚氧基硫氣的产率能达到90%以上。将得到亚氧基 硫氣溶解在四氢呋喃中与叔丁基钾四氢呋喃溶液混合，搅袢反应lh，反应结束 后，用丨mol/L的盐酸调pH至3.0，加水，同时用乙醚提取反应产物，过滤、干 燥后得到2，2, 4，4-四甲基-3-硫杂环丁酮，产率也能达到90%以上。在密 闭反应釜中让2, 2，4, 4-四中基-3-硫杂环丁酮、盐（最好是磷酸盐等弱酸 盐）及氨衍生物在100T以上的温度下进行反应，2，2，4，4-四甲基-3-硫 杂环丁酮和氨衍生物的缩合物，产率可达到90%以上。为避免高温、高酸性条 件下的副反应，此反应所用的盐，其pKa最好在1?4。第二步，反应产物2，2，
1.常规毒理学和致癌性分析分别在试验动物大鼠、小鼠和狗的食物中添加不同剂量的纽甜做亚慢性和慢 性饲养试验来评估纽甜的安全性。评价的指标有临床观察、体检、体重、体重的 增加、食物和水的消耗里、血液学、临床生化、尿检和眼科检查。此外，还对狗
表3 -18 三氮蔗糖及其衍生物与受体蛋白的作用部位
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相，1/10体积的饱和氣化钠溶液洗涤该溶液，再用等体积的溶剂（S)洗涤氣化
系数表明，斥电子取代基会带来分子甜度的增加。这类取代基能增加酰胺氮原子 的氢键作用力，故可带来分子甜度的增加。前述的Fujino化合物具有很高的甜 度，这也可用方程式（2-32)来解释。在该类化合物中，两个酯基团的存在使 得o■?值增大，而2, 6-二甲基环己基和葑基酯上的甲基分支使得（％)2值增 大，W此增大了分子的甜度。
图2-23所示为在以乙酸乙酯为有机溶剂的二相体系中，pH和Z-A叩- PheOMe合成的相对起始速率的关系图，图中还表示了在饱和乙酸乙酯缓冲液中 的合成结果。闭合圆（?）为根据有机相中的Z-Asp-PheOMe算得的反应起 始速率；半圆（O)为根据水相中的Z-Asp-PheOMe算得的反应起始速串；虚 线（-?〇-）为根据缓冲液中的试验结果算得的反应起始速率。在该二相体系中， 在所研究的pH范围内，由于PheOMe在水相分配不好，因此根据有机相中的 Z - Asp - PheOMe算得起始合成速率比根据在饱和有机溶剂缓冲液中算得的小。 但是，当水相pH减小，PheOMe对水相亲和力增大，使在饱和缓冲液和在二相 体系中的反应速率差值减小。因此，二相体系中反应最佳pH应在酸性范围。
立体选择性催化氢解纽甜酯的脂肪酶和酯酶可以分别通过黑曲锥(Aspergil lus niger)、米曲霉(AspergUlus oryzae)、南极洲假丝酵母（Candida anlarctica)、 柱状假丝酵母(Candida cylindracea)、产朊假丝酵母(Candida utiiis)、娄地靑祗 (Penicillium roqueforti) x 洋葱假第胞菌(Pscudomonas ccpacia)、少根根箱(Rhi- zopus arrhizm )、水生嗜热杆菌（Thermus aquaticus )、小麦胚芽、假单胞菌 (Pseudomonas sp. )、B 型假单胞傲(Pseudomonas sp. type B)、芽抱杆菌(Bacil- lus sp. ) x咕热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、猪肝、马肝、兔肝以 及酿酒酵母(Saccfmwmyces ce—、等获得。一般脂肪酶首选B型假单胞菌 (Pseudomonas sp. type B)，醋酶首选从猪肝提取（表2 - 26) 0
