治理等方面有着不可比拟的优点，是比较适宜的生产方法，但目前也仍然存在需 要克服的难题。
素，-/3 -甘草亭酸-—^3 -脱氧-18 -/3 -甘草亭酸L3 -表-18 -甘
其罝换过程可简单表示为：
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
④在等甜度条件下，甜菊苷替代蔗糖平均摄入量的一半以上。
DMBA的精制：DMBA粗品与硫酸氢钠在醉和醚混合溶剂体系中形成不溶性的 DMBA加和物，过滤后，用少量醇/醚混合溶剂洗涤，得到的加和物在碳酸氢钠水 溶液中解析，变成纯净的DMBA。用此方法制得的DMBA可满足制备_的要求。
表 2-41
为了跟踪安赛蜜可能的代谢途径，人们用Mc标志的安赛蜜在白鼠、狗及猪 身上，后来也在自愿受试人身上进行试验。试验结果表明，安赛蜜不参与任何代 谢作用。无论是动物还是人体均能排出此化合物，没发现它的任何代谢活动。因 它不经代谢就排出体外，因此没有任何能量作用。
另有人把蕺菌血红蛋白基因(vgb)基因在毕赤酵母中的功能应用于高甜度 莫奈林所组酵母，解决毕赤酵母高密度发酵中存在的供氧不足的问题，进一步提 高髙甜度莫奈林的产萤。他们将获得的由高甜度莫奈林和vgb两个基因同时整合 的重组酵母GSU5/pPIC9M/pPlC3.5kV,以甲醇诱导，高甜度英奈林基因和vgb 基W分别以分泌和胞内的形式得到表达，且表达产物均有生物活性。VHb在胞 内的成功表达，使重组毕赤酵母高甜度莫奈林的分泌表达量提高了 20%，达
