Assadi - Porter等应用基因突变技术探索 Bragin甜味功能位点，发现蛋白的两个结 构K域对甜味活性至关重要：一是蛋白N端 和C端相互紧靠的区域，二是43位精氨酸 附近的可变环区。
由于莫奈林分子中较为稳定的a-螺旋结构含量较少，其完整的三级结构因 而较易受到各种变性剂的迅速破坏。变性的结果导致了三级结构的无序化，分子 甜味随之丧失。但构象上的轻度变化是可以容忍的，并不会导致甜味的完全消 失。用十二烷基硫酸钠或50%乙醇溶液处理，造成货奈林蛋白质变性并失去了 甜味，分子中a-螺旋结构的含量有所增加。但用25%乙醇溶液处理，不会引起 构象和甜味的变化。莫奈林对碱十分敏感，值单独由于喊引起的变性而造成紧密 肽链结构的伸展现象还是可逆的。例如，pHlO.9环境下引起的变性，当用酸调 节至PH3.3时，其三级结构仍可恢复。此时，尽管分子的整体构象并没完全恢 复，但甜味却部分恢复了。
(—)Brazzein的物化性质
阿斯巴甜前体作为一种二肽化合物，理论上可以采用重组DNA技术进行生 产。该法生产过程首先是采用重组DNA技术合成了阿斯巴甜前体Asp-Phe (图 2-27),然后再对苯丙氨酸的羧基进行化学酯化反应即可得到阿斯巴甜。
①白鼠摄入大量的糖精后会出现各种明显的生化和生理特性变化，但这些 异常变化在人体正常摄入范围内不会出现。
世界各地的实验室已在人体和各种动物（大鼠、小鼠、狗、猴子、兔子、 猪、鸡、豚鼠）身上对甜蜜素及其主要代谢产物环己胺的其他潜在毒理（包括 诱变性）进行了广泛的试验，结果表明没有任何数据可认为甜蜜素和环己胺在 人体正常摄取范围内有中毒危险。以各种口服形式对甜蜜素和环己胺进行了许多 有关基因毒性试验，表明甜蜜素和环己胺都没有诱变性，也没发现有癌变或有遗 传缺陷的胚和细胞。
本法只需以葡萄糖和蔗糖为前体，但要通过发酵产生G-6-a，这是一个昂 贵的过程，因为它需要杀菌操作及分离除去G-6-a中的葡萄糖。此外，虽然 果糖转移酶反应可以在高底物浓度下进行并获得较髙得率的S - 6 - a，但分离提 纯S-6-a则是困难的，因为所有试图结晶出S-6-a的努力都不成功，它只能
CGTasc*/(U/g? 粉）
首先用标准三醋物方法（standard triester methodology)，合成2个部分互补 的含12个核苷酸的短链：① d ( TpCpGpApApApTpCpGp ApApG)② d ( TpTpTpCpGpApCpTpTpCp GpA)
