该氣化反应在较温和的条件（如701)下进行，能选择性地与蔗糖分子中 较活泼的伯位羟基6、6'反应，但研究表明，它还可使蔗糖五乙酸酯的r发生氣 代反应，理论得率为40%以上。该反应最好在叔胺介质中进行，特别是在诸如 吡啶之类的杂环叔胺。当三芳基膦中的1个芳基被交联聚苯乙烯的苯乙烯基团取 代成为三芳基膦结合树脂，反应完成后则容易将未反应物和副产物氧化膦过滤 去除。
(四）辅助因素对产率的影响研究表明，在低熔点混合物中加入适宙:的有机溶剂能降低混合物的熔点，从 而提商酶反应的效率。图2-66所示为加入不同溶剂对反应产率的影响。其中， 加入二甲基亚砜（DMSO)和2-甲氧基乙酸乙酯（MEA>能使产率达到60%， 而辛醉和正己烷的加人使产率低于50%。这可能是因为疏水性的有机溶剂能够 改进和保持低熔点混合物的特性，从而能够促进酶反应的产率。图2 -66 不同辅助有机溶剂对反应产率的影响 注：有机溶剂都按丨5% (w/w)的比例加人，苄氧羰基-L-天冬氨酸二乙《和D-内氨酰胺分 别加人0.5mmOl, <?-胰凝乳蛋f*丨酶浓度为丨5% (w/w)和丨2% (w/w)的水，37?€下反庖丨Oh。表2-37同时加入DIV1SO和MEA作为低熔点混合物的辅助因子对反应产率的影响
三、三氣蔗糖的生产技术
值得注意的是，三氣蔗糖-3,, 4#-环氧化物是不甜的。由于环氧化作用所 导致的呋喃环构象形变，并不足以抵消三氣蔗糖和受体模型之间的色散作用，这 就意味着果糖基的3#-oVl是构成甜味AHs/BJ、t的必需部分。同样，2，r-二 氧-2，1'-二脱氧-甘餌蔗糖也不甜，说明葡糖基的2-OH也是蔗糖衍生物甜 味所必脔的。
停止。滤去催化剂，将滤液罝于冰浴中，用浓盐酸酸化，然后置于冰箱中使其结 晶完成。收集柚莳二氢查耳酮晶体，水冼后使其在水中进行重结晶，真空干燥后 得104g (94%)的晶体（熔点not)。若再在丙酮中进行敢结晶，则可得到另 一种晶形的晶体（熔点212弋，质世94g)。
以嗦吗甜基因中322bp Ncol片段作为探针，与九awamori基因组中的单拷贝 gdhA基因杂交的694bPPvuII片段作对照，对转化体进行DNA印迹杂交分析以估 计各转化体中嗦吗甜表达盒的数最。分析表明，在各转化体的表达盒没有发生重 排，各拷贝数为5~14 (表5-9),表达盒的拷贝数与嗦吗甜产率有明显的相 关性。
人们对新橙皮苷二氢奄耳酮在不同温度和pH下的稳定性情况也做了研究。 在室温水溶液中，pH大于2时，n不会水解生成游离单糖和糖苷。即使有时发 生水解现象也不会完全失去甜味，因为橙皮素二氢査耳酮也有甜味，尽管溶解度 不大。n在loot、pH2~10的缓冲液中至少可以稳定8h。根据实验的结果，新 橙皮二氢查耳酮水溶液室温下见光保存几年后，颜色略为变黄，但几乎觉察不出 甜味有何变化。
注：本表系水滚液中的测定教据，括号内教振系蔗糖与二氬查耳《等甜度时的浓度比值.即二氮金卑 明的相对甜度。
三、纽甜的甜味特性1991年，美国纽特公司通过对强力甜味剂结构-甜度关系的广泛研究而提 出假说，认为人体的甜受体（HSR)可能含有2个完全不同的疏水结合位 (HBP),两者相距丨rnn。当时，普遍认为阿斯巴甜是通过它的苯环与甜受体的一 个疏水结合位之间的疏水反应而作用于甜受体的。根据这种双疏水结合位假说， 他们认为阿斯巴甜的疏水基衍生物有可能作用于假设中的第2个疏水结合位 [图2-42 (1)]。从分子模型的分析中，可以判断使阿斯巴甜作用于假说的第2 个疏水结合位的最好、最简单方法就是在它的氨基上结合以疏水取代基。通过多次 尝试，他们发现了几种斤-烷基或/V-环烷基取代基可以作用于假设中的第2个 HBP (表2-24)。其中最有效的取代基是3, 3-二甲基丁基[图2-42 (2)], 结合这一取代基后的阿斯巴甜，以摩尔数汁与2%蔗糖溶液相比甜度由原来阿斯 巴甜的约170倍，增长到纽甜的约11000倍，以质量计则为由约200倍增长到约 1_倍。甜度的大大增加，证实了在人体甜受体中第2个独立疏水结合位的 存在。
