C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶（GAP)基 因，其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh ￡co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段（-976? -1，推断+丨为翻译起始位点）作为启动子，用引物在V端加上N?d位点， 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段（+ 1006? + 1728)作为终止子，用引物在V端加上BamHI位点，在V端加上Pst丨位点， 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接，构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建：从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2，在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点，构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切，并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后，与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后，与含CYH抗性 基因的丨.1比？311-5&丨1片段（-184?+974)连接，构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到，用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域（+4?+356)和 3'区域（+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段，这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段，从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段，两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间，构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和？8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
因为嗦吗甜分子能与食品或饮料中的阴离子组分发生反应，因此，在不降低 分子总体甜度的前提下，人们正致力于降低嗦吗甜分子总电荷虽的研究。阿拉伯 胶及其微酸性聚合物能阻止嗦吗甜与合成包素的反应。往嗦吗甜溶液中添加至少 6份（但不多于20份）阿拉伯胶能阻止它与酒石黄、口落黄或丽春红-4R—类 色素结合而发生沉淀或浑浊现象。即使将阿拉伯胶-嗦吗甜混合液离心处理也是 如此。当阿拉伯胶添加量超过20份时，嗦吗甜的甜味有所受抑制，至少比添加 6份时的甜度低，而且溶液也不很稳定。较好的比例是9份的阿拉伯胶添加1份 的嗦吗甜，这样配制出的混合物体积大，易于操作。这种混合物还可与麦芽糊 精、乳糖或山梨糖醇混合，以利于进一步发挥填充剂的物理性质。因为嗦吗甜的 甜度很大，即使添加了很大数世的填充剂，如1份的嗦吗甜添加20份的填充剂， 其甜味特性也没受到明显影响。往饮料中添加5mg/kg的嗦吗甜能增强产品风 味，此时苒添加lOOmg/kg阿拉伯胶，产品的稠度和口感也不会发生什么变化。
图6 - 18 ZOt时甜蜜岽水溶液的相对密度与浓度的关系曲线
这种生糖背在C-4位置上带有一羟基。人们的 研究目的在于用其他极性相似的基团代替其葡 萄糖基酯，这样不至于丧失甜味。1981年，
每个参数前的系数表明，二肽化合物分子的甜度随分子疏水性和体积的增大而增 加，怛随分子垂直于轴距离的增大而减小。 .
(四）苯酐二硫化物法
糖分子与甜受体相互作用的3种机理
阁2-24 40^€时，pH和Z-Asp-PheOMe合成平衡得书关系阁 注：①?春-、-△-、-▲-、?□?、-■?表示在不用底物浓度和a值妞合时，Z-Asp-PhrOM*?在有机相的 得牟;②-Z - Aap = PheOMe = 80mmol/L, a = 1;③-A-, Z - Asp = PheOMe = 80ramol/L, a *5；④-▲-，Z - Asp = PheOMe = 80mmol/L, a = 10;⑤-Z - Asp = 80mmol/L, PheOMe = 160mmol/L, a =10;
甲苯法生产糖精钠的工艺流程见图 6-11。
