晋宁区三氯蔗糖
(-)两相体系中Z-Asp-PheOMe的合成反应动力学 要定量分析两相反应,首先需弄淸下列关系:①固定化酶催化反应在水相中进行,因此需了解反应在饱和有机溶剂缓冲 液中的动力学和平衡关系;②底物和产物在水相和有机溶剂中的分配比;③分配比引起的水相pH变化;④水相、有机相之间物质传递产生的影响;⑤酶在界面吸附引起的变化。
表3 -18 三氮蔗糖及其衍生物与受体蛋白的作用部位
图2-22比较了 401时以乙酸乙酯为有机溶剂的二相体系中(水相和有机 相体积比为丨),合成Z-ASP-PheOMe的实验结果和计算结果,曲线表示计算 结果。由阍可见,在pH5.0时,Z-Asp-PheOMe (ZAPM)的理论值和试验值 很吻合。PH6.0时,反应刚开始二者吻合很好,但后来试验值大于理论值。这个
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶(GAP)基 因,其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh £co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段(-976? -1,推断+丨为翻译起始位点)作为启动子,用引物在V端加上N?d位点, 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段(+ 1006? + 1728)作为终止子,用引物在V端加上BamHI位点,在V端加上Pst丨位点, 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接,构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建:从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2,在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点,构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切,并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后,与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后,与含CYH抗性 基因的丨.1比?311-5&丨1片段(-184?+974)连接,构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到,用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域(+4?+356)和 3'区域(+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段,这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段,从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段,两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间,构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和?8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
(1)甜蜜素的钠、钙盐均没有急性毒性,半數致死量LDW对小鼠是 7~17g/lcg,对大鼠是12~17g/kg,这表明甜蜜素没有急性毒性。
图5-11带L41诳内质基因的质粒的限制性酶切图 上方是由基因组DNA文库筛选得到的庾粒的艰制件《切ffl。细线条表示质粒pBR322的部分序列; 粗线条表示能与探针杂交的区域;序列位置和长度如箭头所示。
图4 -41 二氢钕酮醇衍生物的化学结构图
尽管巨大芽孢杆菌NCIB 8508可以专一地将葡萄糖发酵成为G -6 -a,但并 非所有的葡萄糖都能被转化为G-6-a,因此发酵完成后仍必须从葡萄糖中分离 出G-6-a。理论上最多可以从3mol葡萄糖中得到2mol G-6-a,即可获得 56%左右的G - 6 - a。
包括酰胺化、霍夫曼降级、酯化、重氮、
图3-30显示,低温对蔗糖C-6位的单乙酰化有显著效果。其原因可能在 于,在低温下各反应基团的活性都下降,蔗糖其余游离羟基活性被钝化,而最活 泼的C-6羟基此时尚有反应活性,因此S-6-a的得率较高。薄层色谱结果也 表明,随宥温度的升卨,反应产物渐趋复杂。当反应温度髙于0T时,薄层上出 现3个以上的斑点,其中S-6-a的斑点出现拖尾现象,斑点颜色也很浅。从图
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