黟县安赛蜜
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
三氣蔗糖的甜度是蔗糖的400?800倍，其甜味纯正，不带任何不愉快的苦 后味或金属后味。
1965年偶然发现阿斯巴甜具有甜味之后，揭开了人类对二肽甜味剂的研究 序幕。阿斯巴甜在经历了长达15年的风风雨雨之后，终于在1981年得到美国的 批准使用。以阿斯巴甜为原型，人们研究了 1000多种与之相关的同型物，其中 不乏有实用价值和良好开发前景的甜味剂新产品。与此同时，还建立了甜二肽的 分子模型等基础理论。
糖楮的协同增效作用较小。有报道安赛蜜|
蔗糖的化学结构（与天然D-蔗糖镜像关系D-蔗糖和L-蔗糖的甜味特性正好可与D-氨基酸和L-氨基酸相比较。 在许多情况下，D-氨基酸是甜的，而L-氨基酸却没有甜味。例如D-色氨酸 比蔗糖甜35倍，而L-色氨酸是苦的；D-苯氨酸比蔗糖甜7倍，而其L-异构 体是苦的。有人因此推断认为味蕾受体是不对称的或具有手征性，所以镜像化合 物的味觉感受不一样。然而着眼于D-蔗糖和L-蔗糖都具有相同的甜味特性， 可知这个推论还有很大的局限性。
1968年，报道巴拉圭等地妇女用甜叶菊的根、茎和叶子作一 种避孕药每天食用。Harms还进一步说明小白鼠每天摄人用甜叶菊叶、茎磨制的 粉在水中沸腾lOmixi后的滤液，12d后发现其繁殖能力降低至79%以上。
一般成年人的味莆数约有9000个，而婴儿的味蕾 数可能要超过1万个。人的味受体即位于舌表面 味莆尖端的小孔道内，由手指形的微绒毛 (O^ji.mxZOpLm)组成D味细胞的其余表面全为 扁平而不与外界通透的沟状细胞包裹，故受体的 微绒毛只有通过味莆尖端小孔道才能与口中唾液 接触。因此味刺激分子必须具有一定的水溶性，才能随唾液流入味莆孔穴中，吸附于受体膜表面 上而产生味感。
除了对二氢氧氮水环二氧化物环上不同取代产物进行研究外，人们还合成r 结构类似的化合物以观察环上的变化对其甜味的影响悄况，但没发现其他任何新
相反，当以2-0H/3-0为AHS/BS对时，甜味蛋白受体和三氣蔗糖的两个分 子间氢键AHr (NH3J……Bs (3-0)和B, (C0NH2)……AHS (2-0H)的距 离和键角分别被迫成为（0.29±0.01) nm, (180±16)。和（0.28±0.01) nm, (160±20)°,如图3-54所示。此时只有4-C1 (X5S) 一个疏水部位和受体 < 氨 基酸残基侧链宥着良好接触，而其他两个疏水部位r -C丨和f -C1却处于远离 与受体相互作用的位置。而且，4’-0H也远离受体X:氨基酸残基的侧链，使得 4f - OH与受体X丨氨基酸残基的酸性侧链之间不可能形成重要的额外氢键。因 此，选择2 - 0H/3 - 0作为三氣蔗糖分子的AHS/BS对并不合适。
在蔗糖溶液中，SIMPLE的NMR分析表明，在氚化二甲基亚砜中有两种不 同的分子内氢键构象处于动态平衡中，即作为受体的a-0H基团接受T-OH 或3'-OH基团（图3-51)。蔗糖和三氣蔗糖的这些氢键相连构象明铋与分子内 包含2-羟基和3-羟基生甜团有密切关系（图3-40) ^这两个基团有相似的结 构要求。当蔗糖和三氣蔗糖分子内部氢键连接而转变成分子与味莆蛋白的外部氢 键连接而形成复合物时，其结构会发生微小的但又是淸楚的变化，因此降低了感 知甜味所需的构象能量。
