黄石港区安赛蜜
对Brazzein分子中的半胱氨酸、赖氨酸、酪氨酸、组氨酸和精氨酸的化学修 饰均导致甜味的降低或丧失。Brazzein的半胱氨酸具有极为重要的结构意义，它 们的还原和S烷基化将导致Brazzein 二级结构的解体和三级结构的破坏，从而使 甜味活性丧失。仔细分析除半胱氨酸外化学修饰硓示的其他重要活性相关残基, 可以推测分子中的2个区域可能是其活性中心的组成部分：一个区域以a螺旋和 卢折叠的链DI之间的转角为中心，包括分子中唯一的组氨酸HiS31以及残基 Arg33、Lys27和Lys30;另外一个区域以冷折香的链II和链DI之间的转角为中 心，包括残基Tyr39、Lys42和Arg43。在Brazzein的三维结构中，含Arg33的区 域接近残基Tyr54和Tyt51，因此，它与C端有着密切的关系。总的说来，这些 数据表明，C端是Brazzein甜味产生的必要因素。
表6 -8 安赛蜜在不同pH缓冲液lOOt：的稳定性
曾尝试在大肠杆菌中表达重组奇异果素。在表达载体中插人以化学法合成的 奇异果素基因，所得的载体即转化成大肠杆菌菌株HB101。尽管通过SDS - PAGE和Western印迹分析可检测到重组奇异果素的存在，但是，所得的通组奇 异果素并不具味道修饰作用。在酵母和转基因烟草中的尝试结果也一样，尽管都 成功地表达出了重组奇异果素，但是产物也不具备甜味诱导活性。
过在60弋保持lOmin，然后在4t、pH4.5条件下保持lh,可得接近单一组分的 莫奈林（经SDS - PAGE测定）。通过离子交换柱可进一步纯化，得率约为 100mg/10g湿酵母（700mg可溶蛋白〉。提纯得到的萸奈林与天然莫奈林甜度一 样，阈值丨网，通过CD光谱分析比较重组莫奈林和天然莫奈林的二级结构单 元，因此可以预料两者必然有相同的三级结构。
酶法合成肽，首先要选择一种适当的催化肽键形成的酶。已研究过可实现缩 合反应的蛋A酶主要冇以下几种。
三、蔗糖的氯代衍生物
Sun等人成功地在转基因莴苣中获得了重组奇异果索，首次从外源宿主获得 具有生物活性形式的奇异果素。编码奇异果素的cDNA是用R duUifica果肉中的 所有RNA合成的，并被克隆于植物表达载休——PBI121或pBE2113-GUS。载 体pBI121和pBE2113-GUS都含有CaMV35S启动子、胭脂碱合成酶（nos)启 动子和终止子。此外，PBE2113-GUS载体中还含有带翻译增强子（E12-35S- H)的启动子盒。所有这些都被引人A 菌株GV2260。通过感染带载
(二）C-6羟基化学保护法（单基团保护法}
该转糖苷反应中，底物KU浓度及反应时间对转化率的影响见表4-13、图4-20。RU浓度较低时，RU-F合成速率较高，RU的转化率（RU-F/RU)在 反应初期达到最大。RU浓度0.025nu)l/L时，反应lh,达到最大转化率88%。 RU的转化率随RU浓度上升而下降，RU浓度0.5mol/L时，反应20h,转化率 为19%。S、RU的结果类似。S浓度0.025mol/L时，反应0.5h后转化率达 到 80%。
1.反应时间和加酶最的影响
