郧西县安赛蜜
图5-2 乙醉溶液浓度对嗦吗甜甜味刺激反应的影响
R, H2
第三节安赛蜜
从表2-57可知，肽键对甜味的维持也很重要。酰胺基不能被甲基化 [121]或颠倒[丨22】，也不能被酯[123]或酰肼[124]所取代。这可能是因 为酰胺键（肽键）参与了二肽与甜受体之间的相互作用，因此不能变动。硫代 酰胺[125]的甜味较阿斯巴甜低，这与上述观点相一致。
旋= 1:12. 5，w/w)溶解时,可以尽可能地避免在反应过程中产生蔗糖脱氧环化 衍生物。因此，本研究仅以蔗糖和乙酸酐的摩尔比、反应温度和反应时间等三个 因素，分别对S-6-a的合成条件进行优化，结果如图3-29至图3-31所示。图3 -29蔗糖和乙酸酐摩尔比对取酯化反应效果的影响（-丨8*C、7h)图3-30反应温度对单酯化反应效果的影响[蔗糖：乙酸酐=0.95 (mol/mol), 7h]时 N/h围3-31反应时间对单酯化反应效果的影响[蔗糖：乙酸酐=0.95 (mol/mol),25 *C]
(一）BraMein表达载体的构建
由上看出，以三苯基膦-CC14进行氣化得率偏低，需加低级醇（如甲醉） 来终止反应，并去除剩余三苯基膦和氣化三苯基膦，操作步骤较Vil8meier试剂 多，且三苯基膦价钱较贵，相比之下ViUmeiei■试剂略胜一筹。
由于RGal - U、RGal - lb和RGal -2的19 -竣基相连的葡糖基的C4—0H 为游离羟基，因此不适合作CGTase催化转糖苷反应的受体。A/, vinacea的《 -半 乳糖苷酶催化可选择性地将半乳糖基连至甜叶悬钩子苷的13 - 0 -葡糖基上。
X光衍射表明，糖精钠是以二分子聚合物形式存在的，其酰亚胺的氢基与酮 的氧基之间有氢键相连。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
