宁县水苏糖
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
蔗糖甜度的提高定会使摄人最减少，这就降低了能摄的摄人虽，此外，衍生 物还能抑制转化酶或0C -葡萄糖酶的水解作用，这又进一步抑制了人体对它的代 谢作用。从上面结论可明显看出，要增加蔗糖的甜度，衍生化必须提高分子的亲 油性，特别是在轴向C-4及C-P位上，而C-2和C-3^[上需保持羟基游离 的状态，W为它们是生甜团三角形中的B和AH单元。
政府管理部门基于不同的政策和个别机构的惯例，即便使用相同的临床前期 安全性资料，也会制定出不同的无毒副作用水平。其结果是，不同的机构对同一 种混合物可以制定出不同的可接受的每日摄入量。比如，在缺乏任何毒性指征的 悄况下，世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会在制定无毒副作用水平和可接 受的每日摄入最时，不认为由于食物可口性的降低和食物消耗的减少所致的体重 增长减悵是副作用，而美国食品与药物管理局（FDA)则把这些因素都考虑 进去o
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Dzendolet提出的假说认为奇异果素掩盖了酸味受体，使酸分子阴离子基团 产生甜味觉。Bartoshuk等人认为，奇异果素在酸存在下能增强甜味，是由于产 生混合抑制效果降低了酸味觉的可感知性。
5.5(与阿斯巴甜的很接近）D
研究表明，与蔗糖结合后处于活化状态的受体蛋白，其AH-B、B-XH、 XH-G丨、G,-G2、G2-G3、G3-G4 和G4-AH距离都约为0?65mtl,这七个识 别部位通常是天然糖甜味分子的基本识别部位，空间排列为非对称的七边形。
一、二肽甜味剂的基础研究
在双酶-化学联合法合成三氣蔗糖中，最值得关注的是优化G- 6 - a的发 酵条件以及改善糖和糖酯的分离技术，这将有助于提高该法的效率，因此，需要 对G-6 - a形成过程中的生物化学和生理学机制进行详细的研究以简化该操作。 而快速分析、良好的反应控制以及适时地终止反应，也是双酶-化学联合法合成 三氣庶糖所必需的。同时，以蔗糖为原料经微生物发酵作用，直接生成S-6-a 的方法相当诱人，在这方面值得花大力气加以研究。
之后，Oertly等人根据Cohn提出的“生味基团”（sapophoric groups)这一 概念，认为可用有味官能团“助甜团”（auxoglucs)和“生甜团”（glueophores) 来对甜味进行很好的解释。他们认为这种助甜团与生甜团类似于有色物质的助色 团和发色团，并列举了这两种官能团的各种组合形式，同时还假定仟何没有同时 具备“助甜団”与“生甜团”的物质就不具备甜味。但是，Oertly并没有进一步 解释人工甜味剂（如糖精）或蛋白质甜味剂的甜味情况，也没考虑这两种官能 团在单一分子中可能的作用方式。Oertly的冇味官能团假说还是没有超越甜味剂 的分子结构特征。那种认为可根据分子结构推知其甜度的假说在20世纪初并没 被人们所接受。
