汶川县果糖
基末端的311个氨基?酸序列（pCKKhb只含141个氨基酸）的cDNA序列 (SS-B2),和两个串联作为类KEX2蛋白酶切割位点的LyS-Arg序列，以及用 每菌优选密码子合成的嗦吗甜II基因（tha)和S. cerevisiue的CYC1转录终止子。
五、髙效甜味肽的分子基础与构效关系
(一）不同卤素取代基对甜度的影响卤素取代基大小及其电负性大小，对蔗糖衍生物甜度具有明显影响。4, r, 6,-三溴蔗糖衍生物的甜度是蔗糖的800倍，而4，\\ 4\ 6-四溴蔗糖衍生物 的甜度为蔗糖的7500倍，显然溴取代基的尺寸能使甜味分子更好地结合到味莆 受体上。电负性较强的氟取代基和尺寸较大的碘取代基都不能如此大幅度地增强 甜味，如4, 6,-三氟蔗糖衍生物的甜度大约是蔗糖的40倍，而4, r, 6'-三碘蔗糖衍生物大约比食糖甜120倍，而相应的氣代蔗糖衍生物和溴代蔗栅 衍生物的甜度分别为蔗糖的600倍和800倍，说明溴代蔗糖衍生物和氣代蔗糖衍 生物具有最合适的分子大小和电负性。
用冰?酸调丨’/pH罕3.5。在含EDTAO.Immo丨/L .醋酸lOOmmoI/L的混合溶液 中进行Scphadcx G-25tt ( 2.2cmx45cm ) ?胶过滤.检测足污有蛋白质
CH2—C CH=C
目前已有多种含巯基试剂如氧化型谷胱甘肽和胱氨酸用于蛋白质折黉复性， 其中采用胱氨酸比用氧化型谷胱甘肽成本低。将含巯基化合物胱氨酸合成蛋白 质-巯基半胱胺化合物阻隔游离的蛋白质巯基，这样可以有两个好处：变性蛋A 的水溶性敁著提高；只有加人弱还原剂后巯基才能进行相互交换。用还原型胱胺 化合物从变性蛋白质生产天然嗦吗甜的折叠过程如图5-5所示，最终得率提高 至约5pg/mL (25%),可以用品尝试验测定。酵母嗦吗甜A、B折垒复性的得率 较低，酵母嗦吗甜I不能折奋成天然（甜味）构型。酵母嗦吗甜的N端氨基酸 (一内氨酸）虽被乙酰基阻隔，但经-?系列试验证明这种修饰对蛋白质折替及甜味 没有影响。这些结果表明：嗦吗甜丨和A的另一个不同的氨基酸即第113位的 氨基酸可能不是天冬酰胺而是天（门）冬氨酸。
图3-47 4-氣-4-脱氧-半乳糖基-蔗糖的合成 (Piv = COCMe,) I RSOjCl, Pyr
半乳糖基蔗糖衍生物都具有很强甜味，半乳糖基蔗糖这一概念由Hough等 人首次提出，通常卤素取代后，蔗糖衍生物C-4的构象发生翻转，从而使蔗糖 分子上的吡喃葡萄糖苷环转化为吡喃半乳糖苷环，因此称为半乳糖基蔗糖。使用 高度亲油性卤素原子，取代蔗糖葡糖基和 果糖基上特殊位罝的羟基，这些特殊位置 包括 C-4、C-\\ C-4'和 C-6、可以 使蔗糖甜味明显增强，这些位置与甜味分 子亲水基团位置对立。蔗糖可能具有两个 不同生甜团，分别为2-OH (AH) /3- 0(B)和 3' - OH (AH) /2 - 0 (B),
Nofre等报道，以5%钯碳作为催化剂，在40T、0. 4MPa氢压下对甲醉化的 APM氢化13h，当催化剂含水量为60%，且循环使用5次后，催化效果最好。 反应结束时，氢化反应液中含NTM89. 5%、APM7. 3%、二取代APM0. 6%和二 取代脒唑酮类化合物（二肽结构物质环化形成的副产物）1.3%。将上述氢化反 应液在40T下加一定萤的水，水解3h。水解反应结束后减压浓缩至甲醉浓度为 25%，冷却析晶，并冷冻至使结晶完全。40尤下真空干燥2d可得纯度近 100%的NTM,以起始原料计，NTM的回收率为73%。
四、Brazzein的应用
