包河区AK糖

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在脉冲前,细胞经二硫苏糖醇(di丨hiothrehol,DTT)处理或在样品中加人载 体DNA都+能提高转化率。用标准醋酸锂程序(standard lithium acetate procedure) 将线性PCLRE2转化至CandUu utULs得到的转化率非常低,1网DNA的转 化体不到10个。
脱去。表2-S 保护基团及相应条件注:TFA =三氤乙酸.X=说士,a =根#条件可说士或不脱去,b =不发生反应,c =犮生反0 = ?定?2.添加有机助剂法由式(2-6)可知,随者P&增大,PK2减小,平衡常数增大。通常在有机 助溶剂或多羟基醇存在时,溶液的介电常数减小,因此加入助溶剂可增大P&, 由此增大(尺或式(2-6)两边取对数得
表2-52 L-天冬氨敢-D, L-氨基丙二酸酜胺酯的结构与甜
注:Trp/lac,大肠杆供色氨酸和乳糖启动子;
P 必,—=(1 + 0 + a
选用正交表U (34)安排试验,试验方案如表3-7所示。试验结果表明, 最佳反应条件为:S-6-a: Vilsmeier 试剂=丨:7 (mol/mol); S-6-a 浓度 15%; 反应温度1201;反应时间2.5h。在该条件下进行反应,摩尔产率可达35.6%, 说明控制适当的反应条件,可提高三氣蔗糖含摄,降低其他衍生物含摄。
这个结论不久就受到其他研究者的反驳。Heijckn等人指出C -端手性碳中 心两个R基团的大小和长度均会影响甜度,例如,用高级酯取代阿斯巴甜的甲 醋会导致甜度的下降。同样,苄基团若用其他更长的基团来替代,甜度也会下 降。在F,Dd构象中对旁链长度不存在明显的阻碍层。意大利的研究人员发现, 旁链的长度对甜味很重要。Heijden认为Fn D■构象能与甜受体发生相互作用, 它的两个R基闭均能与甜受体发生作用,但当基团太大时会阻碍分子接近甜 受体。
已知TCK只有在亲水的溶剂中才能高度溶解,但在保证酶解反应能得到 必要的水的前提下,a-半乳糖苷酶却被证明在与水不互溶的有机溶剂中, 最稳定并具有最高的活力。这个矛盾,可以通过使用被含水缓冲液预饱和的 有机溶液时得以解决。研究发现,高水混溶的溶剂如二氣六环、丙酮、甲醇 和四氢呋喃等,即使使用高达30%的含水缓冲液进行预饱和,也不支持 a-半乳糖苷酶的水解反应。但在含水缓冲液预饱和的正丁醉、甲基异丁基 酮和乙酸乙酯三种溶液中,TCR的溶解度均达到50%以上。这些溶剂同时 也支持a-半乳糖苷酶的活力,只是三者对三氣蔗糖的溶解性存在很大的差 別,如表3-9所示。

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