甘州区阿斯巴甜
Candida utilis有多佶染色体(多于二倍染色体）但没冇性生活周期（sexual life cycle) , W而无法得到营养缺陷型突变株作为转化的宿主细胞。因此开发核 糖体^41蛋白的突变基因作为选择标记基因。
图3-40蔗糖分子的生甜团C-4 (X)、C-2 (B)和C-3f (AH)
图5 - 1所示为嗦吗甜分子三级结构示意图。
要在酵母中表达嗦吗甜，首先要合成相应的基因。为使基因能在酵母中高效 表达，采用酵母优选密码子合成嗦吗甜I基因，为便于操纵DNA序列，在嗦吗 甜基因设计时在序列中包含多个限制性酶切点。嗦吗甜I基因长度为630bP,它 的DNA序列的5'端和1端分别为Bel I位点和Xho I位点。嗦吗甜I合成基因经 直接定点突变或DNA片段替换合成嗦吗甜A、B基因。将嗦吗甜I基因113位 的天冬酰胺的密码子替换为天冬氨酸的密码子即得嗦吗甜A基因序列，随后将 嗦吗甜A基因46位的天冬酰胺的密码子替换为赖氨酸的密码子即得到嗦吗甜B 基因。
(四）进化启示
甜受体研究表明，化学感是由有序脂质传导，酸、咸、苦味受体均系脂质，甜 受体是蛋白质，苦受体可能也与蛋白质相连，它们均位于味细胞顶端的微绒
在一个研究中用三氣蔗糖作为唯一的碳源，发现有10种口腔细菌和牙斑微 生物不能生长。当往三氣蔗糖中添加葡萄糖或蔗糖后，所有的微生物均生长良好 并有相似的产酸特性。对用[l4c]标记三氣蔗糖的研究表明，它会抑制牙斑葡 聚糖的生成。这表明，三氣蔗糖不会被n腔微生物所代谢，且对合成葡聚糖所必 需的酶系有非竞争性的、可逆性的抑制作用。
3.三苯基膦氧化物与氣化亚砜
在低能量焙烤食品中，必须用膨松剂来代替部分糖和面粉。供糖尿病患者的 食品也可用山梨糖醇和安赛蜜來保证必要的体积和甜度，其甜味和质构均类似用 蔗糖的产品。
Kondo等人曾尝试构建一 SCM质粒并在C— idilis中生产SCM。他们把 SCM基因插入由产脘假丝酵母(C. utUis)克隆来的GAP基因的启动子和终止子 片段之间。通过这种方式，他们获得了高产虽的SCM，表达水平高于总可溶性 蛋白的50%。他们还尝试克降带S. cerevisiae GAPDH启动子的SCM基因用来生 产SCM。然而，所得的产最水平很低，仅为总可溶性蛋白的5%左右。美国一专 利公开了利用P. pastoris生产SCM的方法。首先将合成的SCM基因克隆于含有 S. cerevisiae a -因子分泌信号和GAPDH启动子的PGAPZa -载体，然后将构建的 质粒转化成P.P^tori5GS115，最后通过菌株对Zcocin的阻抗性，对转化株进行 筛选。观察发现所分泌的.1：组英奈林为一条12kji的带。SDS - PAGE分析表明， 通过该方法可获得约10g/L的SCM。这些SCM经纯化后可引起甜味。
