临沭县甜蜜素
1.反应时间和加酶最的影响
在嗦吗甜I、A、B基因的y端，加上3-磷酸甘油活化酶（PGK)启动子， 在3'端加上PGK终止子作为转录终点和多聚腺苻酸信号。将嗦吗甜基因试剂盒， 克隆至及co/i-酵母间的运送载体，质粒pJDB209。由于嗦吗甜基因在￡：.?>/〖和 酵母中都能复制，因此既能在中对基闽进行操纵，又能在酵母中对基闪进 行功能测试。但质粒PJDB209含有一个leu2 - d标记，使办-异丙基苹果酸酯脱 氢酶在酵母中的表达水平较低^将带嗦吗甜基因的质粒转移至突变株中， 这样由于约每200个酵母细胞完成一个突变，因此嗦吗甜基因试剂盒利用 率也提髙了约200倍，基因表达水平也相应提高。
表5 -3 甜蛋白嗦吗甜丨和嗦吗甜n的氨基酸组成
表S-14 奇异果素的氨基酸组成 单位：个
过在60弋保持lOmin，然后在4t、pH4.5条件下保持lh,可得接近单一组分的 莫奈林（经SDS - PAGE测定）。通过离子交换柱可进一步纯化，得率约为 100mg/10g湿酵母（700mg可溶蛋白〉。提纯得到的萸奈林与天然莫奈林甜度一 样，阈值丨网，通过CD光谱分析比较重组莫奈林和天然莫奈林的二级结构单 元，因此可以预料两者必然有相同的三级结构。
为了跟踪安赛蜜可能的代谢途径，人们用Mc标志的安赛蜜在白鼠、狗及猪 身上，后来也在自愿受试人身上进行试验。试验结果表明，安赛蜜不参与任何代 谢作用。无论是动物还是人体均能排出此化合物，没发现它的任何代谢活动。因 它不经代谢就排出体外，因此没有任何能量作用。
由此导致的结果是，(3)表征的味感不仅不甜，反而是苦的。由此，AH-B-X 理论可以很好地解释苯环的位置不同与产生甜味作用的关系。
由于叔丁胺沸点低而极易除去，所以乙酰 基迁移和氣化反应可连续进行，无需在氣 化前分离出6 - FAS,从而大大简化合成 路线。但必须要求溶剂对这两个反应都具 有化学稳定性，而且沸点髙于80T应保证 氣化反应充分进行。
临床试验包括对健康男性用单一剂量范围从0.1到0.5m&/kg体重，连续8h 每小时重复给0.25mg/lcg体重的剂最（一天的总剂量为2mg/kg体重，在8h的 范围内相当于消耗掉20倍的预测的每日摄人量），以及给予健康男性和女性为 期丨3周的纽甜剂量从0.5到1.5mg/(kg*d)或安慰剂[1.5mg/(kg _ d)的纽 甜剂谊相当于每日消耗掉15倍的预测的每日摄人量](表2-31)。表2-32列 出了 13周试验的详细临床试验室指标。
另一个U：验操作是，将50gTRlSPA溶于150mL 二氣甲烷中，加人丨5mL甲 醇和12.5mL浓盐酸，在宰温下搅拌溶液4.5h，用树脂中和盐酸。在真空状态下 于室温蒸去二氣中烷和部分甲醇。加人丨20mL甲醇溶解浓缩物，搅拌30min后 再加6mL水，继续搅拌lOmin。过滤出27. 5g三苯基甲醇沉淀，滤液真空浓缩成 油状物，再加入80mL乙酸乙酯共沸以蒸去剩余水分。将油状物真空十燥过夜, 可得到26g产品。经产品分析，产物熔点为143?150^,与理论值相差较大, 说明产物中含有较多杂质，得率估计在70% ~80%之间。
