浠水县甜菊糖
_法合成的缺点：①它的投料浓度与产物浓度一般都很低，生产张度低，物料处理量大，能 耗大，酶的回收困难；②酶法尚无法独立完成阿斯巴甜合成的全过程，其甲酯化仍需用化学法， 在生产过程需兼具化学法和酶法两套工艺。
图2-8S所示的三种阿斯巴甜类似物均具有强力甜味，其中，图2-88 (1)的甜度为蔗糖的1200倍，图2-88 (2)和（3)均为二肽苄胺，甜度分别 为蔗糖的1300和1500倍。经X射线衍射和核磁共振（NMR)分析，发现图2- 88 (1)在水溶液中有六种构象，两种呈L型，另外四种呈延展型。这六种构象 均对其甜味的产生有贡献，这与图2 -87所示的二肽化合物呈味三维模型所推导 出来的结论完全吻合。
在焙烤试验中未发现安赛蜜的任何分解现象，即使用高温短时法烘烤低水分 的饼干也是如此。但如果慢慢升温的话，大约在225弋下安赛蜜会分解。如果快 速升温，则要在更髙的温度下才会分解。
а,为此，人们希望利用菌株突变作用来解决这一困难。然而目前已筛选出的一 些具冇此种特性的杆菌突变菌种，仍具有蔗糖转化酶活力，而使用转化酶抑制剂 也没有取得满意的结果。
美国Baldwin-Montrose化学公司曾采用此法。此法原料便宜易得，反应条 件温和，但反应操作复杂。日本日东化学公司曾改以环己胺和三氧化硫的气相反 应合成甜蜜素。我国徐光保等采用FJ3N为原料，CH2C,2为溶剂，结晶母液套 用，九次循环试验表明，收率为95.2%。
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
1982年，Medon等人用大鼠对各种精制双萜苷进行了急性毒理试验，得到 与上述相同的结果。他们的结果认为，甜叶菊的任何一种甜味苷，诸如甜菊苷， 甜菊双糖苷A、B、C，甜菊醇糖苷和卫矛苷A等，以2.08/1^的剂量喂养动物 未发现任何毒副作用。根据上述的计算方法，这相当于人体可能摄人迸的480倍
Neoculin是NAS - NBS异形二聚体，而CurtmUn是NBS - NBS同型二聚体。 仙茅蛋白由两个相同的含有丨丨4个氨基酸残基的亚基组成的蛋白质，Neoculin为 一个由一条含有丨丨3个氨基酸残基的、糖基化的酸性亚基和一条碱性亚基（即 仙茅蛋白单体）组成的异型二聚体。
Mortierella vinac.ea的a -半乳糖苷酶，可以催化棉子糖或蜜二糖和甜叶悬钩 子苷的混合体系，进行转半乳糖基反应，产物结构见表4-24。
■，TCTh-21； O, TB2bl -44；垂直细线所示为该倍标准偏差。
