黄平县蔗糖素
棉籽糖是蓆糖分子的Glc (葡萄糖）一侧再接上一个Gal (半乳糖），是一 种三糖分子。由于棉籽糖的Gal基正好位于蔗糖C-6位，充当着C-6的天然保 护基团。因此，本方法是以棉籽糖为原料，直接进行选择性氣化制得6，4\ \\ 6"-四氣棉籽糖，再经a -半乳糖苷酶水解去除Gal-6-Cl即得三氣蔗糖。
关于糖精钠中钠离子的作用，目前还没弄清楚。有一份研究表明，糖精钠的 活性较其他形式的糖精来得大，此外，还发现摄人与糖精钠一样数量的糖精酸 后，并没有膀胱肿瘤病变发生。
图5 - 17 电脉冲转化后培养时间对转化率的影响 注：①细胞与切后的pCLRE2混合后泾电脉冲.电脉冲条件：电容25?tF,内? 100011, 场强 0. 5kV/cm。
第二节甜蜜素
七、阿斯巴甜的安全毒理学分析
图1-丨3 D-氨基酸和L-氨基酸的构甩及其AH、B、X系统吡喃型和呋喃型糖分子环上的氧被亚甲基取代后的化合物称假糖 (Pseudosugar),如少-办-D -吡喃杲糖。这种假糖分子的构象与其相应的正常 糖分子相似，如必-/3-DL-吡喃葡萄糖（阁1 -14)。屮-a-DL-批喃半乳糖 和沙-卢-DL -吡喃果糖的甜度与它们母体糖的甜度相似。环上的氧对糖分子的 甜度没有多大影响。4甲棰吡喃糖苻、甲基呋喃糖苷和假糖的化学结构 (I)甲基-?-D-吡喃葡萄糖什 (2)甲基-彡-D-呋嘣果榭作 (3)屮-卢-D-吡蝻葡鈞铕 (4)甲基吡喃木溏作
提纯得到的嗦吗甜在各水平的RIA分析中均未进行交叉反应，也没有甜味， 这表明胞内嗦吗甜不会在细胞质中折费成甜味构型。
鸡蛋淸溶菌酶娃唯一来源于非植物的甜蛋白，其生物学功能早已被详细研 究，可把它归于甜蛋A却不过是最近的事情。1988年，Maehashi和Udaka声称 鸡蛋清溶菌酶具冇明显的甜味，而其他来源的溶菌酶，如火鸡和中华鱉中的溶菌 酶也具有甜味，但甜味不同，或重些或轻些。相反，人体内的溶菌酶却是没有甜 味的。不同溶菌酶的氨基酸序列都与鸡蛋清溶菌酶的相似，但这些溶菌酶的序列 与其他甜味蛋白之间都没有明fi的同源性。鸡蛋淸溶菌酶的甜味阈值约为 10jjumoI/L,比嗦吗甜和莫奈林的阈值高200倍。溶菌酶的碱性有可能在其甜味 产生作用中扮演重要角色，其中的两个赖氨酸残基——Ly813和Lys96,以及三 个精氨酸残基一Argl4、Arg21和Arg73对溶菌酶的甜味产生起重要作用。
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶（GAP)基 因，其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh ￡co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段（-976? -1，推断+丨为翻译起始位点）作为启动子，用引物在V端加上N?d位点， 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段（+ 1006? + 1728)作为终止子，用引物在V端加上BamHI位点，在V端加上Pst丨位点， 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接，构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建：从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2，在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点，构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切，并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后，与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后，与含CYH抗性 基因的丨.1比？311-5&丨1片段（-184?+974)连接，构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到，用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域（+4?+356)和 3'区域（+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段，这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段，从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段，两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间，构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和？8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
(六）以连三硫酸钠（Na2S306)和环己胺为原料
