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为检测酵母嗦吗甜是否具有甜味构型开发了 WA检测方法(radioirmmmoassay, 放射免疫分析法)。小鼠接种纯嗦吗甜A后会产生单特异性抗体(monospecific antibodies),它的免疫血淸稀释约50000倍后能选择性地与天然(甜味)构型的嗦 吗甜发生反应,时非天然构型、变性嗦吗甜或嗦吗甜的肽段与抗体的结合能力远不 及天然嗦吗甜。RIA可测定的嗦鸣甜最低浓度为Ing/mL,敏感度约是感官品尝试 验的丨000倍,并且适用范围也更广,对粗提物等都可以测定。将溶于SDS的酵母 嗦吗甜经SDS凝胶电泳分离后转移至硝化纤维滤纸富集,用稀释2000倍的老鼠嗦 吗甜A血清抗体进行检测,发现富集后的变性嗦吗甜及其溶解在SDS中的部分都 能被该血清抗体识别,该被识別组分在电泳中与植物嗦吗甜一起发生迁移。但对酵 母提取物进行RIA分析,没有发现能发生交叉反应的可溶性蛋A质,这可能是由 于酵母细胞内的还原态环境使嗦呵甜的二硫键还原而使蛋A质发生变性沉淀,因而 细胞中就+存在天然水溶性的嗦吗甜。并且由于蛋白质N端没有连接分泌信号序 列,细胞不分泌蛋白质。
0.体外代谢试验
TB2bl -44的产物经纯化后得到三种嗦吗甜组分A、B和C (图5-9), 它们与天然嗦吗甜组成略有区别。这是由于在质粒构建时,在表达盒中采用了 两个串联重复的Lys-Arg序列,使KEX容易识别,从而对B2 -嗦吗甜融合蛋 白进行切割释放嗦吗甜。因此在KRKR序列不同位点切割后产生这三种组分, A组分为嗦吗甜II末端加了一个Arg,占丨8%~20%; B组分为嗦吗甜II末端 加了 LyS-Arg,占75% - 78% ; C组分为嗦吗甜II末端加了 Arg - Lys - Arg, 占3% ~5%。由于TG丨)Th-4上淸液中嗦吗甜的结果相同,这三种形式的纯嗦 吗甜都有甜味。
③白鼠身上所发生的肿瘤病变似乎与种属及机体特异性有关,这在目前还
甜蜜素钠盐的分解温度为280T,不发生焦糖化反应,10%水溶液呈中 性,pH6.5D钙盐的分解温度为50CTC,10%水溶液pH为5.5 ~7. 5,在水 溶液中呈钙离子强电解质,易与果汁中的有机酸类作用,也可使乳中蛋白质 凝固。
到目前为止,仍未见有成功表达具有味进修饰活性的兎组Curculin的报道。 至于Neoculin, Ken - ichiro Nakajima等人已成功在九oryzae中实现胞外生产 Neoculin0将每一个NAS和NBS基因与含有一个带有三乙酸基氨模体的KEX2切 割位点的a -淀粉酶基因融合,所形成的两种表达质粒共转化为I oryzae NS4菌
带有芳香基团取代基的二肽甜味剂如图2-92 所示,二甲基-甲氧基苯酚类似物[图2-92 (1)]的甜度约为蔗糖的5_倍,不带甲基后 [图2-92 (2)]甜度减半(25000倍);二甲基苯 基类似物[图2-92 (3)]的甜度为蔗糖的4000 倍,而3 -苯基丙烷基类似物的甜度只有蔗糖的 1000 倍。
髙甜度的肽类化合管甜受体可以再接受一个连接于L-天冬氨酰上新增加的氨基酸,但在立体空间 上仍有所限制。因此,三肽化合物不如母体二肽化合物甜。通过天冬氨酰基芦- 竣基团扩展的三肽[151],同样没有甜味。
初步的毒理试验和长期的食用历史,可以证明罗汉果所含的Mogrosides是安 全的,加上其良好的风味、稳定性、水溶性以及价格便宜等优点,Mogrosides及 罗汉果浸出液作为一种潜在的甜味剂有很广阔的应用前眾,值得大力开发C
通过对嗦吗甜分子的形状与组成氨基酸进行特定的化学改性,可以提髙它的 甜味质苗:。这一研究在学术上很有意义,但在实际应用中意义却不大。Van der Wei研究小组于1981年报逬了许多有关嗦吗甜结构改性的研究悄况,表5 -4概 括了其主要的研究结果。从中可明显看出,即使对嗦吗甜分子只进行了微小的结 构变动,如赖氨酸的乙酸化或天冬氨酸的改性,均会引起分子甜味的期显下降。 当然也得到一些积极的有意义的效果,诸如竣基的酰胺化可使其甜味和味觉持续 时间提高了近6倍。有个未曾预料到的结果是该分子的8个二硫键中即使只有1 个被还原,其甜味也会完全丧失。这或许可以解释过熟TD果实中由于发生了迅 速的降解生成非甜肽与氨基酸,从而引起提取物甜度的下降3
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