临澧县糖精钠
阿力甜（Alitame)是由L-天冬氨酰、D -丙氨酸和C -端酰胺3部分组成， 它是用酰胺键替代阿斯巴甜分子中不稳定的酯键，使得化学稳定性得以显著提 高。用阿力甜增甜的部分酸性饮料，经长时间f*：存后会出现一些不配伍现象，感 官分析发现有明显的硫味。液体产品中可与阿力甜反应产生异味的物质，多数是 H202或NaHSO;等。截止2008年，阿力甜尚未被美国FDA认可，全世界只有中 国、澳大利亚和墨西哥等少数几个国家批准使用。1996年，JECFA确定的阿力 甜AD丨值为1 mg/kg。
对不同内阻下场强对转化率和活细胞的影响作了研究（图5 -18)。细胞悬 浮液与1叫经Bgi fl酶切的pCLRE2混合后在电容25jjlF下进行电脉冲转化，电 脉冲后，细胞在30T添加了 lmol/L山梨糖醇的YPD培养基上培养6h。在场强 为3.75kV/cun和内阻80W1时得到最高的转化率，约为1400个转化体/jxg线性 pCLRE2。在3. 75和5. 0kV/cm和内阻6(X)、800或100011时转化率较高[图 5-18 (1)]0这些条件下细胞存活率为10%?40%，实际脉冲时间为11 ~ 17ms [图5-18 (2)]。当内阻200或400ft时，转化率低。
临时委员会还报进了他们对两个研究的判决，认为这两个研究对分析考察甜 蜜素是否具有致癌性无效。其中一个是在威斯康星大学进行的，该试验是对有外 科创伤的动物膀胱进行注射研究的。另一个是把极端不规则的甜蜜素片转移至受 试动物的膀胱中迸行试验，动物同时还摄取一些胆固醉片。在这两个试验中，试 验动物的肿瘤病变率有所增加，Cranmei?指出，这与其说是由甜味剂甜蜜素造成 的，还不如说是受物理刺激引起的。
由于Bntzzdn独特的科研和产业应用价值，大蛩生产高纯度的Brazzein成为 产业界的目标。Brazzein在天然植物中含量甚微，提取困难，产最受到限制。因 此利用基因工程，在其他宿主中表达该外源基因是快速冇效的途径。美国Nektar Worldwide公司已将Brazzein表达至玉米中，It转基因玉米中能提取1kg Brazzein。 另也曾尝试在酵母中表达合成Brazzein，但没有成功。这里讨论用大肠杆菌表达 Brazzein 基因。
从大量的安全性试验可以看出，纽甜和它的主要代谢产物（DMB-ASp- Phe)对正常机体来说是安全的，纽甜无诱变性、致畸性或致癌性，不会对生殖 或目标器官产生靡性。纽甜极低的使用最，以及其分子和主要代谢产物十分有利 的药物动力学性质，使它具有很髙的安全性。纽甜的无可观察不良反应水 平（NOAEL)对于兔子为500mg/(kg ? d)，狗为800mg/( kg ? d),大鼠为 1000mg/(kg ? d),小鼠为4000mg/( kg ? d)。若假设纽甜的摄人萤约为 50mg/(kg.d)(由阿斯巴甜90%统计水平的使用萤推出），对于这几种动物而 言，纽甜的安全系数分别为1_、16000、2_和8_。而且，一些试验表 明，人体可很好地耐受达到40倍90%统计水平的摄入量。总之，大里的数据都 证明了纽甜的安全性。
注：（）内为理论伹
三、阿力甜的化学合成技术阿力甜的化学合成可以分为三步，首先是2, 2, 4，4-四甲基-3-硫化三 亚甲基氨的合成。在冰水浴条件下，将二氣化硫缓慢加人到二异丙基甲酮中，反 应温度不超过30弋。当反应生成的HC1开始减少时，再反应30min后终止反应， HC1用真空泵抽出。这一步亚氧基硫氣的产率能达到90%以上。将得到亚氧基 硫氣溶解在四氢呋喃中与叔丁基钾四氢呋喃溶液混合，搅袢反应lh，反应结束 后，用丨mol/L的盐酸调pH至3.0，加水，同时用乙醚提取反应产物，过滤、干 燥后得到2，2, 4，4-四甲基-3-硫杂环丁酮，产率也能达到90%以上。在密 闭反应釜中让2, 2，4, 4-四中基-3-硫杂环丁酮、盐（最好是磷酸盐等弱酸 盐）及氨衍生物在100T以上的温度下进行反应，2，2，4，4-四甲基-3-硫 杂环丁酮和氨衍生物的缩合物，产率可达到90%以上。为避免高温、高酸性条 件下的副反应，此反应所用的盐，其pKa最好在1?4。第二步，反应产物2，2，
由表3-5可得，最佳反应条件为：三苯甲基化反应在551下进行4. 5h,乙 酰化反应在115T下进行3h。在该条件下进行反应，TR丨SPA得率可达67. 94%。 另外，在三苯甲基化反应中必须严格保持反应体系的无水状态及干燥，以免三苯 基氣甲烷发生水解。
质粒pCLRM216、pRMll、pUMll的转化体，在lOmLYPD培养基中培养后, 均能产生莫奈林。凝胶定虽扫描表明，奐奈林在pUMll转化体中的表达世，超 过可溶蛋白的50%。以141基因为探针对转化体进行DNA印迹分析，测定 pCLKM216的整合拷贝数为10?丨丨，PRM丨丨为12~丨8，pUMll为20?22。经 DNA印迹分析，确走pKMH和pUMll中没有细菌序列。
