(二）苯酐法
O.Olmol/L的乙酸盐缓冲液。试验结果证实了甘草甜素有抑制牙斑形成的作用， 但其抑制效果与时间有关，随荇时间的延长，甘草甜素对牙斑形成的抑制效果更 为明显。
甜蜜素的钠盐和钙盐均是强电解质，在水溶液中髙度离子化，偏于中性， 略有一些缓冲能力，两者呈白色结晶体或白色结晶粉末。钠盐的分子式 C6H13NO,S ? Na,相对分子质鱼201. 22;钙盐的分子式C12HMN206S2 ? Ca,相 对分子质萤3%. 5^钙盐通常带有两个结晶水，相对分子质量为432. 58，在 丨40T温度下保持2h将失去结晶水。环己基氨基磺酸盐对热、光、空气以及较 宽范围的pH均很稳定，不易受微生物感染，无吸湿性，易溶于水[lg/ (4~ 5) mL],但在油和非极性溶剂（如乙醉、苯、氣仿、乙醚）中的溶解度甚 微，几乎不溶。图6-16、图6-17和图6-18所示为甜蜜素水溶液的一些物 化性质数据曲线。
图I -24 Suosan甜味衍生物的多点结合模型 柬基Suosan ( Cyanosuosan)属于典型的B、AH、D型甜味剂，CN基不仅作 为氢键受体基团，也是重要的吸电子基团，它能增强脲基NH的酸性，因此氰基 Suosan的甜度是蔗糖的650倍。就像超强阿斯巴甜，如果用吸电子能力强的硫朌 子取代氧原子，增强脲基NH酸性，使甜味分子与受体蛋白的亲和力增强，所以 硫代氮基Suosan的甜度是蔗糖的2900倍。
还有些试验报道发现了糖精的代谢产物2-氨磺酰苯甲酸及2-邻苯磺基苯 甲酸，但这些试验所用的放射元素标志水平较低，代谢物仅依靠单一的薄层色谱 (TLC)检测，作者对是否排除了色谱过程中可能形成的后生物并非很有把握。
以核糖体蛋白质L41基因为标记，将用32P标记的含C. makosa的RIM - C基 因的Xbal -Sau3AI片段与Candida utUis ATCC9950的基因组DNA进行DNA杂交 分析，结果表明存在一个与KIM - C基因同源的基因。对Candida ut'dis ATCC9950的DNA用Sau3AI进行部分切割后的片段（5~10kb)转人经BamHI 酶切的质粒PBR322构建基因组DNA文库，用RIM - C基W探针对约30 000个 克隆子进行筛选，筛选得到5个正（positive)克隆子，对其中3个质粒构建了 限制性酶切谱图（图5-11)。该同源基W在质粒DNA上的大致位置通过对质粒 的限制性酶切片段进行DNA杂交分析得到。将能与探针杂交的4kb EcoRI片段 双向亚克隆至质粒pBluescript II SK进行DNA序列分析，现已测定广含L41基因 的2086hP的BamHI - SacI片段的DNA序列（图5 - 12),其排序策略如图5-11 所示。
用最敏感的受试动物 小白氣；②最敏感的动物种（Sprague - Dewley
{三）甜菊苷的分子改性
试验代表了持续不断的接触纽甜及其主要代谢产物。即使大剂虽的纽甜试验动物 的生殖、胚胎发育和出生后发育也没有影响，因此认为在妊娠和哺乳期间使用纽 甜是安全的。
