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由于叔丁胺沸点低而极易除去,所以乙酰 基迁移和氣化反应可连续进行,无需在氣 化前分离出6 - FAS,从而大大简化合成 路线。但必须要求溶剂对这两个反应都具 有化学稳定性,而且沸点髙于80T应保证 氣化反应充分进行。
此外,AH、B、X甜味理论的应用也有助于人们对“相对甜味值”的更好 理解。“相对甜味值”的突出优点是,它将所有甜味物质的全部甜味特性和一种 标准甜味物质(通常是蔗糖)联系起来,并用一个具体的数值来表示,从而大 大简化了对各种甜味剂的联系和比较。但值得注意的是,由于一个甜味剂的所有 味觉属性被简单地组合成一个单独的“相对甜味值”来表示,也造成了其甜味 本质与“相对甜味值”之间存在一定的差异。
美国麻省理工学院Walk J. H. Nauta医学博士写道:“根据这些數据资料, 首次审议时我们不能在阿斯巴甜无毒性方面达成全体一致的意见。我们将这种不 安情况报告给您,但我们赞同您在这种重要情况下对阿斯巴甜所做出的最终批准
不同的Candida utilis菌株电脉冲转化的效率有较大不同。将Bgl D酶切后的 PCLRE2通过电穿孔转化至ATCC9256和ATCC9226,都能得到CYH抗性菌落, 多拷贝载体DNA也串联整合至rDNA区,但转化率都不到ATCC9950的10%。 整合至ATCC9256的pCLRE2拷贝数为6~8,整合至ATCC9226的拷贝数为 5-9,整合至ATCC9950的拷贝数为10?12。
图2-41常见风味物质中的主要醛荜化合物(I)香兰素(R=CH3)和乙基香兰素(R=C2H5)(香草)(2)灼桂》(肉桂> (3)笨中搭(櫻桃和苦杏仁)(4)柠檬搭(柠襻>
(四)辅助因素对产率的影响研究表明,在低熔点混合物中加入适宙:的有机溶剂能降低混合物的熔点,从 而提商酶反应的效率。图2-66所示为加入不同溶剂对反应产率的影响。其中, 加入二甲基亚砜(DMSO)和2-甲氧基乙酸乙酯(MEA>能使产率达到60%, 而辛醉和正己烷的加人使产率低于50%。这可能是因为疏水性的有机溶剂能够 改进和保持低熔点混合物的特性,从而能够促进酶反应的产率。图2 -66 不同辅助有机溶剂对反应产率的影响 注:有机溶剂都按丨5% (w/w)的比例加人,苄氧羰基-L-天冬氨酸二乙《和D-内氨酰胺分 别加人0.5mmOl, -胰凝乳蛋f*丨酶浓度为丨5% (w/w)和丨2% (w/w)的水,37?€下反庖丨Oh。表2-37同时加入DIV1SO和MEA作为低熔点混合物的辅助因子对反应产率的影响
要在酵母中表达嗦吗甜,首先要合成相应的基因。为使基因能在酵母中高效 表达,采用酵母优选密码子合成嗦吗甜I基因,为便于操纵DNA序列,在嗦吗 甜基因设计时在序列中包含多个限制性酶切点。嗦吗甜I基因长度为630bP,它 的DNA序列的5'端和1端分别为Bel I位点和Xho I位点。嗦吗甜I合成基因经 直接定点突变或DNA片段替换合成嗦吗甜A、B基因。将嗦吗甜I基因113位 的天冬酰胺的密码子替换为天冬氨酸的密码子即得嗦吗甜A基因序列,随后将 嗦吗甜A基因46位的天冬酰胺的密码子替换为赖氨酸的密码子即得到嗦吗甜B 基因。
Sarroch Theemsilp等还根据分子组成计算了分子质苗:。奇异果素的氨基酸部 分的分子质量为21257u,糖组分约占13.9%,因此总分子质鱼为24600U (约 25ku),该值是由SDS - PAGE估测的分子质世28000u的88%。对于奇异果素分 子质量,若采用的测定方法或样品不同,结果也不同。在尚未得到纯样品时,根 据粗样品采用不同方法测得的奇异果素分子质迸均约是25ku的2倍。如用SDS -PAGE测定的未还原奇异果素的分子质谊为43kii,约是根据氨基酸组成及糖类 成分计算的分子质萤25ku的2倍。奇异果素的粗提物用0. 5mol/L NaCl从Sepha- dexG-75柱洗脱后,发现分子质世为52ku处的组分具有变味活性。在无DTT 的SDS-PAGE中,在431oi处有一条宽带,而奇异果素还原后,在28ku处有宽 带。天然奇异呆素用低角度激光散射(low angle laser light scattering)测定的分 子质量为90ku。这些结果表明天然粗奇异果素是25ku-肽的二聚体,纯奇异果 素娃该肽的四聚体,有可能杂质使得奇异果素二聚体难以聚合成为四聚体,并发 现奇异果素的纯四聚体和天然二聚体都有变味活性。
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