墨江县甜菊糖苷
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
糖精在人体内不发生代谢作用，这点似乎已经很明确r。然而，最近也有数 篇文献报道发现过糖精的代谢产物，但是这钱报道发现糖精代谢物的测定方法与 步骤有些问题，令人怀疑。
没有人会想到，从一种粗陋且长期被忽略的植物果实中，提取出的蛋白质化 合物竞然会有甜味，而且很可能是地球上至今为止已发现的最甜的天然物质，更 没有人想到它竟然还有良好的风味改良效果。这种令人惊讶的天然物质就是本章 要重点讨论的嗦吗甜，它巳实现工业化生产并进人实用阶段。
Sun等尝试了在转基因马铃磐中生产重组马槟榔。研究人员把全长马槟榔基 因克隆于带马铃薯块茎特异性patatin启动子和来&胭脂碱合成酶基因的终止序 列（NOS. sub. ter)或带CaMV 35S启动子和NOS. sub. tei■的栽体，并把基因和栽 体转染至马铃薯。他们用Southern印迹法分析了转基因植物并通过Northern印迹 法证实了马槟榔n被成功转录。
在KOH作用下，氟磺乙酰乙酸胺分解出氟化物，可环化成二氢氧硫氮杂环 二氧化物，由于二氢氧硫氮杂环二氧化物酸性强，与KOH作用易生成盐类。当 然也可用NaOH或Ca (0H)2代替KOH生成相应的盐类产品。安赛蜜的幣个合 成途径见图6-25。
当研究一类蛋白质的共同功能的起源时，研究人员一般都是通过比较序列 和/或三维结构来寻找这类蛋白质成员的对应部分。然而，人们至今仍未在莫奈 林、嗦吗甜、Brazzein、马槟榔、奇异果素和Curculin中发现序列同源性。通过 Clustal X得出的双序列比对结果表明，莫奈林和其他甜蛋白（嗦吗甜、Brazzein、 马槟榔、奇异果素和Curculin)的相同残基百分比为：莫奈林和奇异果素之间 23% ,莫奈林和Curculin之间仅为7%。如果把鸡蛋淸溶菌酶也考虑进去，那么， 所得的结果[图1-30 (1)]是这些蛋白质完全不存在对应性（mis-alignment): 仅有3个部位具有少许同源性。即使把序列比对仅局限在三种最甜的蛋白（莫 奈林、Brazzein、嗦吗甜>，也只能发现2个相同部位和12个具有同源性的部位 [图 1-30 (2)]。图1-30 甜味蛋白的序列比对 (I)典奈林、嗦叫甜、BraHein、4槟梅、奇异果家、仙茅蛋甶和鸡蛋淸溶菌酶的比对 <2)奂奈林、嗦吗甜和Bra/zrin的比对比较现有的甜蛋白（莫奈林、嗦吗甜和Brazzein)的三维结构，也儿乎没宥 发现它们之间存在任何的相似性。Brazzein、莫奈林和嗦吗甜三维结构的惟一共 同点是二级结构的一个小K域，即符合甜味指要求的办-折登发夹结构，这一结 构具有已在小分子甜味剂所确定的生甜团。
{二）马槟榔的基因表达
在检查试验动物的体重、眼科、心电图和其他重要生命指征时，都没有发现与 纽甜有关的改变，也没有观察到任何与纽甜有关的临床上重要的生理、生化、血液 学的改变。在纽甜和安慰剂组之间所报道的不良体验没有明显的统计学差异。
仙茅蛋白（curculin)是Haruyuki Yamashita等从马来西亚西部的无茎草本棺 物的果实中分离得到的蛋白质，这种植物的果实重约lg,当地 人用这种果实使食品由酸变甜。人们因此认定仙茅蛋白就是那种既具有甜味，又 具有变味活力的奇妙蛋白质。
这个结论不久就受到其他研究者的反驳。Heijckn等人指出C -端手性碳中 心两个R基团的大小和长度均会影响甜度，例如，用高级酯取代阿斯巴甜的甲 醋会导致甜度的下降。同样，苄基团若用其他更长的基团来替代，甜度也会下 降。在F,Dd构象中对旁链长度不存在明显的阻碍层。意大利的研究人员发现， 旁链的长度对甜味很重要。Heijden认为Fn D■构象能与甜受体发生相互作用， 它的两个R基闭均能与甜受体发生作用，但当基团太大时会阻碍分子接近甜 受体。
