利通区蔗糖素
识别部位B为LyS侧链s -按基，识别点B,和B2为Lys e - NH；基团上的氢 原子。识别部位AH和XH为Asp (或Gin)上的办-(或y -)羧基，识别点 AH,和AH2为AH识别部位Asp或Glu羧基上的氧原子，识别点XH,和XH2为 XH识别部位ASp或Glu羧基上的氧原子。识别部位G,、G2、G3、G4为Thi?侧链 CH3CHOH基团，识别点E,、E2、E3、E4分别为相应识别部位上的甲基。识别 部位D为Ser侧链CH2OH基团或Thr侧链CH3CHOH基团，其中芦-0H为氢键 供体。
该法以甲苯为原料与氣磺酸进行氣 磺化时，有近一半的对甲苯磺酰氣副产 物生成，邻甲苯磺酰氣胺化成邻甲苯磺 酰胺的收率仅为75%?78%，因此，甲 苯法生产糖梢钠的总收率不足40%。
一、二肽甜味剂的基础研究
甲醇是一种有毐物质，但在植物细胞壁及细胞间质的果胶中含有咿酯，在酶 的作用下会水解为甲醇，W此甲醇普遍存在于天然果汁中。例如，日常饮用的苹 果汁、葡萄汁、橙汁、番茄汁等果汁饮料中均含有甲醇（表2-9和图2-32)。 此外，在酒类产品（如白酒、黄洒、果酒、木躱酒等）中也含有甲醉。我国蒸 溜酒与配制酒的卫生标准规定，以谷物为原料的酒含甲醇里小于0.04gAg，以 膂千及代用品为原料的甲醇里小于0. 12g/kg。
二、Brazzein的物化性质与甜味特性
一、甜蜜素的物化性质和甜味特性
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
以上四种合成方法中，方法（丨）和（2)均存在原料来源闲难，反应条件 苛刻等缺点，不利于工业化生产。方法（丨）和（4)所窬原料含氟化物，腐蚀 性强，且环境污染严重。方法（3)以工业上易得的氨基磺酸、双乙烯酮、三乙 胺、三氧化硫为原料，反应条件温和，产品收率高、纯度高，是一种较理想的工 业化生产方法，以下是对该法的详细介绍。
人奇怪的是，用嗦吗甜代替蔗糖生产的饼干经焙烤后仍保持部分甜味。
