九原区阿拉伯糖
2,3, 4, 3\ 4f-五乙酸蔗糖酯（4-PAS),中和后加人甲醉得到三苯基甲 醉，反应式见图3-16。反应制得到的三苯基甲醉可用于制备三苯基氯甲烷，以 达到循环利用的H的。
甜菊苷与乳酸、淀粉或葡萄糖混合可降低甜菊苷产品的吸湿性。据说往浓缩 蔗糖或葡萄糖溶液中添加甜菊苷可加速其结晶过程。有些填充剂除了可作风味掩 盖剂或控制甜菊苷的湿润性外，还可使其用于工业化操作，这类物质有淀粉和蔗
通过对嗦吗甜分子的形状与组成氨基酸进行特定的化学改性，可以提髙它的 甜味质苗：。这一研究在学术上很有意义，但在实际应用中意义却不大。Van der Wei研究小组于1981年报逬了许多有关嗦吗甜结构改性的研究悄况，表5 -4概 括了其主要的研究结果。从中可明显看出，即使对嗦吗甜分子只进行了微小的结 构变动，如赖氨酸的乙酸化或天冬氨酸的改性，均会引起分子甜味的期显下降。 当然也得到一些积极的有意义的效果，诸如竣基的酰胺化可使其甜味和味觉持续 时间提高了近6倍。有个未曾预料到的结果是该分子的8个二硫键中即使只有1 个被还原，其甜味也会完全丧失。这或许可以解释过熟TD果实中由于发生了迅 速的降解生成非甜肽与氨基酸，从而引起提取物甜度的下降3
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
研究表明，与蔗糖结合后处于活化状态的受体蛋白，其AH-B、B-XH、 XH-G丨、G,-G2、G2-G3、G3-G4 和G4-AH距离都约为0?65mtl,这七个识 别部位通常是天然糖甜味分子的基本识别部位，空间排列为非对称的七边形。
(1 )采用 土 chrysogenum 的 B2 培动子（2)采用 P. chrysogenum 的 pcbC 启动子 (3) /l.rjwamori 的 gdhA 肩动子（4) /!? n/rfuimM 的 gpdA 启动子
图3-23 =苯基磷氧化物与氣化亚砜的氣化机理
Jin等人为了进一步探求Brazzein的结构-功能关系，在猴子和人体身上进行 了试验。以des-pGlu Brazzein、25 Brazzein突变体和英奈林作为刺激物，将所有这 些蛋白质都溶解至浓度为HXVg/mL的溶液，调节pH至7.0。在猴子试验中， Jin等人通过观察个别的S味觉纤维来记录猴子对上述几种甜味剂的甜味刺激反应。 S纤维的选择标准是它们对甜味刺激的敏感度^在人体试验中，受试人对甜味刺激 物的甜度进行评分，接者把人体试验结果与猴试验电生理学结果进行分析对比。
(-)甜味受体的发现
