六安市山梨糖醇
Mortierella vinac.ea的a -半乳糖苷酶，可以催化棉子糖或蜜二糖和甜叶悬钩 子苷的混合体系，进行转半乳糖基反应，产物结构见表4-24。
RCal - la和RGal-2的世大于1. Omol/L棉子糖。
在C-6’位上的进一步氣化能提高甜度，制得的4，6^-三氣-4，1'，
考虑到安赛蜜水溶液温度与溶解度的关系，因此所得产品可通过重结晶方法 很容易地得到纯化，这就保证了工业化生产规模下能够制出髙纯度的安赛蜜，以 满足作为食品添加剂的纯度要求。
安赛密在大多数宥机溶剂中，溶解度都很低，详见表6-5。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
本反应是要使剩余的3个羟基全部氣化，不存在控制反应限度问题。近年又 报道了多种反应条件缓和、产率较髙、选择性良好的氣化试剂，如氣化氣亚甲基 二甲胺[(CH3)2N?=CHCl]Cle、四氣化碳与三苯基膦、磺酰氣、二氣正膦（如 三芳基二氣正膦、三芳氧基二氣化膦）、氧化三苯基膦与氣化亚砜。
从Fischer■提出的甜二肽分子模型中，可清楚地看出甜味在立体化学上的要 求。然而，等价但更紧密的结构01仍有意义。Goodman和Gilon提出一个相似的 典型例子是L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸（及D-丙氨酸）酯。
研究表明，S-6-a与Vilsmeier试剂在特定参数下可选择性地进行氣化反 应，获得相应的6-乙酰基三氣蔗糖（TGS-6-a)，而且得率很髙。有关资料 认为，1 mol S-6-a最好与21 ~45mol Vilsmeier试剂反应，S-6-a在溶剂中的 浓度以5% ~45%为好，温度丨15~125弋。从理论上分析，lmolS-6-a只需与 3mol Vilsmeier试剂反应，而且过量的酸性Vilsmeier试剂会给设备设计与反应条 件易控制性等带来严重闲难。进一步试验证明，当S-6-a: ViUmeier试剂= 1:13 (mol/mol), S-6-a浓度为10% (w/v)时，反应过程中产生大最黑色沉 淀，是由于S-6-a炭化造成的。故本研究选取Vilsmeier试剂：S-6-a =5 ~ 9 (mol/mol), S-6-a 10% - 20% (w/v),温度 llO-UOt,时间 2.5~4.5h 为研究范围。
(一）甲苯法
