郾城区蔗糖素
Jin等人通过考察更多的突变体，对上述数据进行了优化。ASp29Ala、 Asp29Lys、Asp29Asn和Glu4〗Lys这四种突变体都显示出了比天然Brazzein更为 显著的甜味特性。Ala2itw、A叩2Asn和Glnl7Ala这三种突变体则和天然的 Bmzzein —样甜。在另外8种突变体的甜味尽管明显下降，但仍然还是有味道 的，而有10种突变体，它们几乎和水一样无味，见图5-23。最近，Jiri等人又 通过把天然的Brazzein序列中一个特定Asp替换成Lys或Asu，所得产品的甜味 特性和甜度都有所增强。
(三）蛋白质的生甜团早期研究小分子甜味剂形态而构建的活性位点模型仍可用于解释蛋内质的相 互作用，条件是蛋白质表面具有在化学结构上与小分子甜味剂相似的，可以伸入 活性位点的突出的结构特征，即“甜味指”（sweet fmgers)。因此，早期许多对 甜味蛋白的研究都集中于寻找蛋白质中可能存在的甜味指。
其中，TpTpCpGpApC 部分是Asp-Phe 的密码子，磷酸化后2个核苷酸链以部 分重香模式进行融合，形成较长的双链 DNA分子（图2-28)。该DNA分子有 重复序列和缺口，缺丨〗经T4DNA连接 酶融合形成带2 ~ 500个含12个核苷酸 的基本单元的连续共价结构，然后用限 制性内切酶Taq该融合的质粒在50代内保持稳定，双链DNA在插人点上游有可控的色氨 酸启动子（丨rpE基因），将融合的质粒转移到大肠杆菌K12 HB101，在后动子
形成乙酸酯或其他羟酸是最常用的保护羟基的方法，经常是将乙酸酐在吡啶 溶液中（或其他三级胺中）进行乙酰化，或在NaOAc、KOAc或酸（如ZnCl2、 HC1、H2S04和HC丨0<)的催化下进行反应。6，丨'，6^-三苯甲基蔗糖醚与乙酸 酐反应，使其余5个仲羟基全部乙酰化而生成TRISPA，该反应较易进行，将反 应混合物倒人冰水中则可沉淀出6，r, 6^-三氧-三苯基甲基-2, 3，4, 3\ V-五酸蔗糖酯(TRISPA)0其反应式如图3-15所示，反应的关键是控制反应 温度、时间和反应物摩尔比以使反应完全。
七、基本味之间的相互作用
难度小。本研究采用CH3OH/CH3ONa催化的醇解反应来脱除TGSPA上的5个乙 酿基，将TGSPA溶液用CH3OH/CH3ONa调节pH9,在室温下搅拌数小时，分别 于反应第3、4、5、6小时测定溶液中三氣蔗糖的转化率。如图3-32所示，在 CH3OH/CH3ONa催化的醇解反应中，TGSPA在pH9下反应4. 5h后，反应即已 基本完成，此时转化率约为91%。
另据Kishishita的研究，当将A型晶体进一步干燥，使其含水量降低到3% 以下时，会出现一种新的晶型，即C型晶体，转变后的C型晶体的溶解性比A 型晶体有很大改进。Kishishita对A型和C型晶体进行溶解性试验，分别取两种 晶型的粉末300mg进行压片，然后把压片的A型和C型晶体各放人300inL， 20T：的去离子水中，同时进行搅拌。在溶解30、60和120min后，A型晶体分別 溶解了丨7、34和69mg,而C型晶体分别溶解了 25、42和86mg。
根据图3-31可知，低温长时间反应有利于S-6-a的形成。但当反应时间 大于6h时，“相对S-6-a值”增长缓慢，继续延长时间对反应对提髙S-6-a 得率并无明显效果，因此选择6h为最佳反应时间。
Unilever已成功地生产出嗦吗甜II及嗦吗甜分子的前体化合物，这一杰出成 就是通过多年的努力，应用遗传工程方面的最新知识完成的。有两篇专利文献对 这种生产方法做T相当详细的描述。其中一篇描述的娃利用重组DNA技术把植 物基因的遗传信息引人大肠杆菌{Escherichia coli)细菌寄主细胞内，将“设计 好”的DNA适时移人细菌体内就可生成嗦吗甜蛋白。第?.篇描述的是重组[)NA 分子的结构，它可产出嗦吗甜分子的前体化合物。嗦吗甜D分子的氨基末端有额 外的22个氨基酸，羧基末端也冇额外的6个氨基酸。这种伸长的分子有助于微 生物细胞更易排出蛋白质，因此增加了应用时的经济效益。遗传工程的另一个任 务就是通过基W突变使嗦吗甜分子发生特种变异，以观察其对产品甜度及其他特 性的影响。然而，就H前来说，要把这些实验成果转变成商收化规模生产尚冇不 少困难。另一种适合用来生产嗦吗甜的寄主是酵母或其他无毒性的发酵微生物， 因酵母的食用历史很长，对有关管理部门以及最终消费齐来说吸引力更大些。
