江华县甘露醇
Candida utilis有多佶染色体(多于二倍染色体)但没冇性生活周期(sexual life cycle) , W而无法得到营养缺陷型突变株作为转化的宿主细胞。因此开发核 糖体^41蛋白的突变基因作为选择标记基因。
N-3,3-二甲基丁基(DMB)取代型二 肽甜味剂,如纽甜[图2-90 (1)]及其《-甲 基苯基丙氨酸类似物[图2-90 (2)],前者甜 味为蔗糖7000倍,后者略低。经X-射线和 NMR分析及分子模型测定,它们在水溶液中的 每一种构象均呈现出L-型或延展型,并且,除 了反向L-型以外,其他的DMB基团正好处于 前面所说D冈域。在另一种纽甜类似物[图
Birch及其同事通过对单糖和二糖进行化学改性,主要娃通过醚化、酯化或 取代一个至数个羟基团等方法,来探寻分子中包含在生甜团内的羟基,并命名为 X/AH/B系统。对于葡萄糖分子来说,首先可以排除最基本的6-羟基和1 -羟 基团,因为甲基-D-吡喃木糖苷具有甜味。4,6-0-甲基和甲基《-D-吡喃 葡萄糖苷衍生物不具有甜味,因而也排除了 2,3-乙二醉[邻位倾斜(偏转) 羟基],这样就只有3 -和4 -羟基才有可能构成AH和B单元。通过考察3 -羟 基取代的吡喃匍萄糖苷和木糖苷分子结构,可知3-羟基为B基团。蔗糖分子中 的某些羟基对甜味当然有作用,因此人们选用很多方法来掩盖、改变或替代蔗糖 分子中各个专一的羟基,利用生成的各种衍生物就能研究蔗糖甜味与结构的 关系。
环糊精葡糖基转移酶(CGTase)能将淀粉或环糊精的葡糖基经转葡糖苷作 用转移给其他糖元,因此,可用它催化淀粉或环状糊楮在甜菊苷的糖基上引入新 糖元。转葡糖基反应分2步进行:①由淀粉合成环糊精;②从环糊精转移葡糖 基至受体物质。
不同的Candida utilis菌株电脉冲转化的效率有较大不同。将Bgl D酶切后的 PCLRE2通过电穿孔转化至ATCC9256和ATCC9226,都能得到CYH抗性菌落, 多拷贝载体DNA也串联整合至rDNA区,但转化率都不到ATCC9950的10%。 整合至ATCC9256的pCLRE2拷贝数为6~8,整合至ATCC9226的拷贝数为 5-9,整合至ATCC9950的拷贝数为10?12。
(四)双酶-化学联合法(单基团保护法}
{二)不同位罝取代基对甜度的影响
甜蜜素的钠盐和钙盐均是强电解质,在水溶液中髙度离子化,偏于中性, 略有一些缓冲能力,两者呈白色结晶体或白色结晶粉末。钠盐的分子式 C6H13NO,S ? Na,相对分子质鱼201. 22;钙盐的分子式C12HMN206S2 ? Ca,相 对分子质萤3%. 5^钙盐通常带有两个结晶水,相对分子质量为432. 58,在 丨40T温度下保持2h将失去结晶水。环己基氨基磺酸盐对热、光、空气以及较 宽范围的pH均很稳定,不易受微生物感染,无吸湿性,易溶于水[lg/ (4~ 5) mL],但在油和非极性溶剂(如乙醉、苯、氣仿、乙醚)中的溶解度甚 微,几乎不溶。图6-16、图6-17和图6-18所示为甜蜜素水溶液的一些物 化性质数据曲线。
由于TCR在水中的最大溶解度仅为15%,使得棉籽糖酶解法合成三氣蔗糖 在经济上受到限制。因此,必须首先找到一种合适的TCR溶剂,要求它既能较 大限度地溶解TCR,又能保证《-半乳糖苷酶的活力。
味受体表达细胞的活化是对甜味物质的行为吸引的首要决定W素。