福清市纽甜

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图6 - 1糖楮、糖楮钠和糖梢钙的化学结构
阿斯巴甜的酶法合成技术由于化学合成法专一性差,得率较低,故人们又致力于酶合成法的研究,以 期提髙得率并降低生产成本。酶合成法是使用合适的蛋由酶,将L-天冬氨酸 (氨基闭已保护或未保护)与L-苯丙氨酸甲酯缩合在一起。除此之外的操作, 与化学合成法一样。酶法合成的优点和缺点比较明显。酶法合成的优点:①转化率通常达95%以上,比化学法(一般仅70%)高很多;②且酶法只生成《-型产物,没有冷-异构体生成;③可采用外消旋化合物为底物,而在化学合成法中只能采用L型底物。
1.底物浓度和反应时间对产物的影响
①环状结构变小;②与酰胺连接的碳原子上带有小分支链;③向碳环上引入硫原子。
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸(甲硫氨酸)[图5-24 (2)], 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸,经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化,因此用快速定点突变将核酸酶基因(SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸(正亮氨酸)对核酸酶活性没有影 响,SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点,这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因(SW基 因)插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间,得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生,蛋白质在lac启动子的控制下生产。
7;而nie/似的果实重10g左右,内分三部分,每一部分都含有一个大而黑的 种子,种子外面包绕层多糖类黏液,顶端有一层假种皮。假种皮上的白色肉状组 织内含有的甜的蛋白质成分,就是Thuamatin (嗦吗甜),商品名称为Talin。
三、阿斯巴甜的化学合成技术阿斯巴甜的生产方法有3种:化学合成法、酶合成法和基因工程法。总的说 来,已有的生产公司多采用化学合成法,酶法较少使用,至于基因工程法,仅在 理论上作了分析。
④使全长B链和A链在半胱氨酸存在的条件下反应并折登成马槟榔D,所 得的马槟榔U在lmg/mL范围即可产生带涩感的甜味反应。
第一章茚味与.甜味刑輝论......
四、利用环糊精葡糖基转移酶改性甜菊苷

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