凉山州索马甜
单基团保护法合成三氣蔗糖，首要步骤是将蔗糖活泼的C-6位羟基进行单 独保护，然后再通过选择性氣化取代C-4、T，位上的羟基，最后脱去C-6 位上的保护基团生成终产物三氣蔗糖。如图3-28所示，除了各个步骤间必要的 分离操作，幣个制备过程主要包括以下3个步骤3①利用适当的保护基团，在合适的反应条件下，对蔗糖分子中的C-6位羟 基进行单基团保护。②选用适当的氣化试剂，选择性地氯化蔗糖C-4、\\ 上的羟基。图3 - 28单基团保护法合成三氣蔗糖的主要少骤③脱去C -6位上的保炉基团使其恢复为自由羟基，得到三氣蔗糖。
五、嗦吗甜的生产技术
产率。
医药工业通常使用蔗糖和高果糖浆，作为一种配料，它们能够改善药品的适 口性，提供甜味、稠度及凉爽的口感，使产品对微生物性质稳定。其他可供选择 使用的甜味剂（如山梨糖醇之类）甜度不大，过量摄入还会引起肠齊问题。嗦 吗甜甜度大，可提高糖醉的甜度，其持续的甜味还可掩盖药品不良的苦后味。它 还能增强通常用来掩盖医药品中不良味的薄荷、肉桂和冬靑之类组分的作用，加 上嗦吗甜水溶性好，在溶剂中的稳定性也很好，所有这些都决定了它特别适用于 制药工业。
达水平没有区别。但是在rDNAK整合的质粒转化体，在非选择性培养基上 培养50代后，莫奈林产量明显下降，而整合点在UKA3区的质粒的转化体 中没有明显下降，见图5-19。不带萸奈林表达盒的载体一直都保持稳定， 这说明莫奈林的高产可能会导致在rDNA区粮合载体稳定性的显著下降。且 培养50代后，pUMll转化体对CYH (4(Vg/inL)保留抗性的细胞数占总细 胞数的80% -100%, pCLRM216和pRM丨丨转化体为0% ~ 30%。这些结果 表明URA3区是在C. utilis中最优多拷贝整合点。URA3栽体除能维持载体序 列稳定外，它还在转化前去除了细菌序列，这对于食品工业蛋白质生产是很 有益的。
第三步，分离6-甲基-3, 4-二氢-1, 2, 3-嗯噻嗪-4-酮-2，2-二
味的强度还与水溶性有关。完全不溶于水的物质实际上是没有味的，只有溶 解在水中才能刺激味觉神经。因此，甜味物质与舌表面接触时，需在舌表面溶解 后才能产生味觉。这样，产生味觉的时间就有快有慢，而且味觉持续时间也有长 有短，蔗糖比较容易溶解，甜味觉的产生较快，消失也较快；糖精较难溶解，因 此味觉产生得较慢，而味觉维持时间却较长。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
表3 -8 酶法水解四氣棉轩糖制备的酶活力比
其化学结构见图4 -18，它的甜度是蔗糖的 125?200倍，甜味特性比甜菊苷更接近于蔗糖。
