兴文县蔗糖素
果素。首先，导入重组奇异果素基因，构建重组奇异果素的表达质粒，并在表达 质粒中插人KEX2切割位点；然后，将表达质粒导人如orrzoe，获得30 个产重组奇异果素的转化株。选择产量最高的菌株进行大规模培养，培养时间为 3d。Western印迹分析确定了培养基表面有重组奇异果岽的存在。结果还显示， 在非还原条件下，60ku处有一条宽带，301O1处仅有一条校糊的带；而在还原条 件下，60ku处的带消失，30ku处的带却变宽。这些结果与两个30ku单体在非还 原条件下形成60ku的二聚体的事实相符。重组奇异果素的产量估计为2mg/L培 养基，纯化重组奇异果素的产S娃0.8mg/L培养基，所得的单体重组奇异果素 和二聚体重组奇异果素的分子要比天然奇异果素的大。对N42、186Q突变体的 N端糖基化位点的分析结果清楚地表明，这是由于所得糖蛋白的糖链部分质里有 所不同而造成的。
(4)对小鼠、豚鼠、大鼠和狗的试验表明甜蜜素对心脏没有损害。有关对 腮鼠心脏伤害現象的报道是值得怀疑的，这似乎跟种属特性有关。
(二）苯酐法
机理-与机理二、机理三的不同之处在于其离子通道是由刺激物分子打开 的，它要求持久性和强度这两因素都是由一个简单刺激产生的。它似乎与由于刺 激物溶液浓度、体积和温度的改变而引起对持久性和强度的不同影响效果有些矛 侨。此外，甜度较大的分子其持久性未必较长。
甜蜜素（Cyclama丨e)姮美国伊利诺伊大学的研究生Michael Sveda于1937年 偶然发现的，并于1945年申请到美国专利2275125。后来，位于伊利诺伊州北 部的芝加哥Abbott实验宰进行了必要的安全毒理学分析，美国食品与药物哲理 局于1949年批准甜蜜素钠盐为公认的安全物质后，投放于市场。几年之后，又 出现了甜蜜素钙盐。
由于到B前为止，还没有冇关奇异果素原子水平结构方面的资料，为了更好 地研究奇异果素的甜味，Antone丨la Paladino等预测了奇异果素的三维结构并应用 比较建模与分子对接技术模拟了奇异果素的二聚体和四聚体形态。
图6 - 3 90弋时糖精钠/钙水溶液的相对 黏度勻浓度的关系曲线
Iwamura的结论认为立体空间参数和带电参数是甜度的主要影响W子，而 Heijden等人和MiyashUa等人的结论认为立体空间参数和疏水性参数是1：要的影 响因子。显然，他们的结论并不-致，丨wamiira认为这种差异是由于Heijden忽 略了带电因素引起的。然而，应用QSAR分析法分析带有一定可变异性结构的大 基团时，这种差异经常会存在。QSAR分析结果，往往还与被选择的具体化合物 有关。例如对某些化合物來说，丨wanmra分析使用的Sterimol参数就与疏水性有 关，故可用lgP (分配系数）来代替。另外，通常认为充分伸展的构象是二肽 化合物的最佳构象，所以忽略了构象方面的任何影响，这也影响了分析结果 的精确性。
