景东县低聚木糖
用在非水溶性有机溶剂中的闶定化酶催化反应是二相反应体系的-个特例。 在该系统中，多孔载体内部空隙中的缓冲液和在载体外的有机溶剂组成r二相体 系。由于在载体内部的水相体积比有机相体积小，因此由式（2-17)知能增加 平衡常数。5.其他方法
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
(一）糖精的代谢
浓度/(g/1 OOmL溶液〉
人们对新橙皮苷二氢奄耳酮在不同温度和pH下的稳定性情况也做了研究。 在室温水溶液中，pH大于2时，n不会水解生成游离单糖和糖苷。即使有时发 生水解现象也不会完全失去甜味，因为橙皮素二氢査耳酮也有甜味，尽管溶解度 不大。n在loot、pH2~10的缓冲液中至少可以稳定8h。根据实验的结果，新 橙皮二氢查耳酮水溶液室温下见光保存几年后，颜色略为变黄，但几乎觉察不出 甜味有何变化。
阁5-23野生型Brazzdn的带状图
有一篇H本专利描述了结合使用酸的钾、钠盐与氨基酸能缩短味觉持续时 间，但该专利不是针对T.donie/Zi〖提取物，而是指姜货属植物。
甜分子与甜受体之间的相互作用对结构相关的同型物的甜度测定结果，使人们推测到有关甜分子与甜受体相 互结合的理论学说。等摩尔浓度的《，海藻糖与甲基a-D-吡喃葡萄糖苷的 甜度相等，在不同浓度下它们之间就存在一定的联系，这意味着二糖分子中只有 一半（假定是非还原性糖基）与受体发生作用。最近人们的观察范围已扩大到 对存在于葡萄糖浆中各种麦芽糊精的观察。因为等摩尔浓度的各种糊精甜度相 等，这就证明了一个糖分子中实质上只有一个残基与受体发生作用。用氢化葡萄 糖浆进行类似的研究证明它是非还原性尾端残基，这个实验证实的分子对味觉受 体的影响效果现已扩大应用到其他一些含有甜（或苦）味的分子中去。
半乳糖基蔗糖衍生物都具有很强甜味，半乳糖基蔗糖这一概念由Hough等 人首次提出，通常卤素取代后，蔗糖衍生物C-4的构象发生翻转，从而使蔗糖 分子上的吡喃葡萄糖苷环转化为吡喃半乳糖苷环，因此称为半乳糖基蔗糖。使用 高度亲油性卤素原子，取代蔗糖葡糖基和 果糖基上特殊位罝的羟基，这些特殊位置 包括 C-4、C-\\ C-4'和 C-6、可以 使蔗糖甜味明显增强，这些位置与甜味分 子亲水基团位置对立。蔗糖可能具有两个 不同生甜团，分别为2-OH (AH) /3- 0(B)和 3' - OH (AH) /2 - 0 (B),
图3-37各种有机溶剂对TCR转化成三氣蔗糖的影响 Christopher Bennett等人齊对从从vinacea和思曲潘(A. niger )中获得的 ?-半乳糖苷酶，进行提高水解反应速度的试验，包括使用表面活性剂、增加离 子强度和提髙反应温度等。前两种方法均不成功，但发现当pH为5.0?5. 5、反 应温度为551时，酶的失活和反应速率处于最佳平衡状态。此时，歸.vinacea 中获得的a-半乳糖苷酶，对TCR水解反应的& =5.8mmol/L，最高速率
