太康县木糖
二氢查耳酮作为甜味剂可应用于食品、饮料、糖果和医药品中。它们持久的 甜味和恒定的性质使之特别适合应用于口香槻、糖果、牙裔和漱【:丨剂之类产品。 由于新橙皮二氢査耳酮甜度大，使用时必须添加些糖醉之类填充剂，故必须注意 各种组分配料的风味配合问题。有些专利描述了二氢查耳酮与蔗糖、非糖类甜味 剂、葡萄糖酸内酯或香草醛混合使用有很多优点。
(-)嗦吗甜的代谢特性
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
阁3-丨8乙酸浓度及反应时间对 6-PAS产率的影响
例如，在三氯蔗糖中，6-0H和6'-C1间所形成的分子内氢键导致呋喃环 的假旋转和分子内糖苷键C, -0-Cr的轻微转动，使位于果糖基单元的6f-Cl 占据了可与受体活性位点相互作用的位罝，从而有助于三氯蔗糖与甜受体的紧密 结合并提髙甜度。
最后制备6-甲基-3, 4-二氢-1, 2，3-嗯__4-阐-2，2 - 二氧化
二、甜菊双糖苷的生产技术甜菊双糖A苷与其他双萜苷一样可从甜菊叶子中提取。但更吸引人的方法 是酶法水解甜菊苷成rubusoside，然后再通过一系列化学反应转化成甜菊双糖 A苷。
通过感官品尝，确定了添加三氣蔗糖的工艺要求添加童（TDL，％)及甜味 等价值（SEV，相比于蔗糖>。假如添加过多，则会使制出的食品太甜而不能令 人接受，因此还确定了三氣蔗糖添加萤的限值（SLV)。当有半数品尝人员觉 得试样品太甜或非常甜时的三氣蔗糖添加萤而确定的自限水平（self - limiting level),除以TDL即得自限值SLV。有关研究人员提请FDA批准的有关三氯蔗糖 TDL、5￡￥和51^的数值见表3-丨1。因各人对甜物质的甜度要求不同，因此要 确定各食品中三氣蔗糖的精确添加鱼是比较闲难的，有关品尝数据仅供参考。
(2)只有用含甜蜜素高于丨％的饲料喂养大鼠，才出现体重下降现象。 在喂养小鼠时也发现相同的情况。以4g/kg的甜蜜素钠盐喂狗30(丨或以 1.5g/kg的甜蜜素钠盐与糖精钠以10: 1混合的混合料喂狗2年，没有发现狗 生长受抑制现象。以200mg/ (kg ? d)的甜蜜素钠盐喂雌糇5年以上，也没 影响其生长。
果素。首先，导入重组奇异果素基因，构建重组奇异果素的表达质粒，并在表达 质粒中插人KEX2切割位点；然后，将表达质粒导人如orrzoe，获得30 个产重组奇异果素的转化株。选择产量最高的菌株进行大规模培养，培养时间为 3d。Western印迹分析确定了培养基表面有重组奇异果岽的存在。结果还显示， 在非还原条件下，60ku处有一条宽带，301O1处仅有一条校糊的带；而在还原条 件下，60ku处的带消失，30ku处的带却变宽。这些结果与两个30ku单体在非还 原条件下形成60ku的二聚体的事实相符。重组奇异果素的产量估计为2mg/L培 养基，纯化重组奇异果素的产S娃0.8mg/L培养基，所得的单体重组奇异果素 和二聚体重组奇异果素的分子要比天然奇异果素的大。对N42、186Q突变体的 N端糖基化位点的分析结果清楚地表明，这是由于所得糖蛋白的糖链部分质里有 所不同而造成的。
