东方市果葡糖浆

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Rubusoside还带有明显的苦后味。有人利用巨大芽孢杆菌 (BacUlus megaterium)产生的环糊精葡萄糖基转移酶对 Rubusoside进行改性处理，得到数种同型物的甜度更高，
后来，Heijden等人通过应用Sterimo丨计算机程序计算出旁链原子距A、H和 B的距离，对上述数据作了优化。同时，还对甜味分子旁链长度的最大值、最佳 值和最小值作了估算。对于两种给定的构象Fn Dn和F, (图2 -82和 图2-83),表2-69所示为其疏水键合位X距AH-B处的最佳距离。S是X到 A、H和B处的最短距离
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
草亭酸，在胆汁中仅占0.36%,嵌中占0.09%。这些结果表明甘草甜素和甘草亭 酸主要与血浆蛋白相结合。在肠肝循环（即胆汁分泌和再吸收循环）中发现有甘 草甜素的存在，怛甘草亭酸几乎都被代谢掉。
为提高分析精度而应用放射元素标记三氣蔗糖的研究结果，证实了上述酸性 条件下的降解产物。用经[%C1]标记的三氣蔗糖溶液分别在4CTC, PH2.5、 3.0和3. 5条件下贮藏1年，贮藏8、16、26和52周时分别检样，并用薄层色谱 分析测定，从薄层板上取出试样用液体闪烁法（Liquid scimillalion counting)计 数分析，其结果见图3-9。从图中可看出两种降解产物的增加与三氣蔗糖的减 少情况。
甜菊苷易水解成甜度较低的甜菊醇生糖苷。
图3 -34所示为在单糖专--性果糖转移酶合成S -6 - a过程中，底物和产物 浓度的变化。从图中可以看出，在反应初始阶段发酵生成S-6-a的起始速率和 时间成线性关系，随后逐渐失去线性关系，这可能是因为葡萄糖对酶的竞争性抑 制作用和底物浓度降低的缘故。在此期间，少数低聚糖副产物也会通过转果糖基 作用而形成。在反应后期，反应速率和S-6-a的降解速度及剩余蔗糖的浓度和 酶的活力有关。反成过程中，S-6-a的最高浓度可达到12%,得率约为58%， 随后S-6-a会慢慢水解，使果糖浓度逐渐上升。由此可见，5-6-3的得率是 处于动态发展中的，其最大得率依赖于果糖转移酶所引起的各种反应。