景东县阿斯巴甜
二、仙茅蛋白的甜味与变味特性
Lamphear等通过转基因玉米生产Brazzein，获得了产萤髙达AOO^g/g种子的 重组Brazzein。研究人员已合成了 Brazzein基因，并把基因融合于植物表达载体， 如组成型启动子（maize polyubiqutin - like promoter)、embryo - preferred 启动子 (maize globulin 1 )和 endosperm - preferred 启动子（maize 22k^, alpha - zein)。其 中，用含embryo - preferred启动子的表达栽体可获得最高的表达水平，产最约达 种子总可溶性蛋白的4%。从80g玉米粉中可提取4.3mg带甜味的f(组Brazzein。 美国Nek丨ai■公司利用转基因玉米生产Brazzein,估计从U玉米中可提取1kg甜蛋 白，国内也有转Brazzein基因瓜果的研究报道。
天然仙茅蛋白的相对分子质最经低角度激光散射测定为27800，单体的相对 分子质最12491，经分析推断天然仙茅蛋白是两个相同肽链通过二硫键构成的二 聚体。经测定，仙茅蛋白含丨丨4个氨基酸，其中天冬氨酸、亮氨酸、甘氨酸的含 贵较高，没有检测到糖组分，说明仙茅蛋白不是一种糖蛋白。仙茅蛋白的氨基酸 序列见表5 -20。仙茅蛋白及其和麦芽糖结合蛋白构成的融合蛋白都能在大肠杆 菌中表达，但具体情况还未见报道。
(一）阿力甜的化学结构阿力甜（Alitame)的化学结构如图2-58所示，它由L-天冬氨酰、D-丙 氨酸和C -端酰胺三部分组成。C -端的酰胺是由2, 2, 4, 4 -四甲 基-thienanyl-胺转化而成，它是形成阿力甜髙甜度特性的关键因素。在研究过 程的I.-天冬氨酰-D -丙氨酸-酰胺同型物中，分析认为对髙甜度特性有益的 结构特征：
对于9种参差构象中主链与旁链形成角度少、p和-的度数已做了铕确计 算，至于剩余键角则作了一些简化的假设。这样计算出的各种构象布居数与 NMR实验数据很一致，如表2-70所示。虽然其他很多构象布居数均占一定的 比例，怛？|01]构象的优先性得以证实。
Vilsmeiei?试剂作为氣化试剂，反应温度必须髙于95T以使不活泼的V位发 生充分氣化反应，但反应温度过髙，反应时间过长，容易造成6-PAS分解或炭 化。我们对其氣化反应的温度和时间进行了系统研究，结果如图3-24所示，在 I15T下反应4h，TOSPA得率可达72. 3%。
(三）通过水解实现各种甜菊双糖苷之间的相互转化加碱皂化甜菊苷和甜菊双糖E苷可生成相同的甜菊醇糖苷，这过程通过添 加10%Na()H或KOH水溶液，经过lh的回流反应即可完成。通过使用含有 KOH的甲醉-水溶液，可提髙甜菊醇糖苷的得率。
一、Brazzein的化学结构
(一）BraMein表达载体的构建
