桐梓县甜菊糖苷
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
试验代表了持续不断的接触纽甜及其主要代谢产物。即使大剂虽的纽甜试验动物 的生殖、胚胎发育和出生后发育也没有影响，因此认为在妊娠和哺乳期间使用纽 甜是安全的。
六、蔗糖衍生物构效关系的研究蔗糖的甜味与其分子上的羟基密切相关，被氣原子取代后的蔗糖衍生物甜度 大大增强。Wiet& Miller报道，萠糖的氣代衍生物仅仅是增强了蔗糖的固有感官 甜味品质，蔗糖氣代衍生物的甜度-时间特性与蔗糖十分相似。对蔗糖进行其他 化学修饰，如甲基化、乙基化、丙基化、丁基化或苯甲基化，通常生成苦味衍生 物。根据氣取代位S的不同以及甜味分子亲水/亲油的平衡关系，蔗糖衍生物具 有强力甜味、甜味、甜苦味甚至苦味等不同风味品质。
食品添加剂可接受的每日摄入量是在动物试验的无毒副作用水平基础上外加 100倍的安全系数，由政府管理机构和专家委员会来制定。可接受的每H摄入摄 不是一个安全阈值，是指在人的一生中每天可以安全食用该添加剂的限萤，但是 偶尔超过可接受的每日摄人最也是可以的。
总的说来，具有高效甜味的二肽化合物在分子结构上不仅必须具有符合一定 距离的两性离子，能增强其甜味的疏水基团（X)还葙要处于生甜团（AH-B) 附近的合适位置。而具有甜味的二肽化合物在水溶液中的构象一般呈现L-型或 延展型。此外，二肽分子三维模型中的D区域处若能被某一基团填满，或者二 肽化合物带有的两个芳香环相互靠近，产生较强的分子内作用，都能显著提高二 肽分子的甜度。
显然，具有显著a-半乳糖苷酶活力的酶制剂都是从霉菌菌丝体中获得的。 在5个具有最强的水解TCR活力的筠菌中，有4个是从W.wVwcefl中获得的，有 1个是从C. muscae中获得的。其中Af. vitmcea ATCC 20034在所有被测试的微生 物中，对TCR具有最高的水解能力。从该微生物中提取的a-半乳糖苷酶（EC 3.2.1.22)不含转化酶的活力，目前已在甜菜糖精炼中被用来水解棉籽糖。它还 可以被固定化，此时对TCR则有更强的水解能力。
给试验动物的膳食中添加的纽甜浓度超过0.05%?3. 50%的范围时，食物的 可口性就会降低，从而导致动物拒绝进食或食后溢出，这与所给的动物每千克体 重的纽甜剂量无关，而与膳食中纽甜的浓度有关。例如在13周的试验中，因为 随着动物体重的增加，膳食中纽甜的浓度要不断增加以维持试验要求的以千克体 重为基础的剂萤，所以当纽甜在睛食中的浓度从50g/kg (膳食的5%)降到 35g/kg (膳食的3.5%)时，狗实际上消耗了更多的纽甜。用纽甜对年幼大鼠 (1~13周）所进行的1年或2年的试验，没有发现与纽甜有关的食物消耗或食 物转换效率的改变，因为生长期的年幼动物当其生长的生理需要战胜了可口性差 的膳食时，它就会“饥不择食”。
图I -24 Suosan甜味衍生物的多点结合模型 柬基Suosan ( Cyanosuosan)属于典型的B、AH、D型甜味剂，CN基不仅作 为氢键受体基团，也是重要的吸电子基团，它能增强脲基NH的酸性，因此氰基 Suosan的甜度是蔗糖的650倍。就像超强阿斯巴甜，如果用吸电子能力强的硫朌 子取代氧原子，增强脲基NH酸性，使甜味分子与受体蛋白的亲和力增强，所以 硫代氮基Suosan的甜度是蔗糖的2900倍。
