淳化县甜菊糖苷
糖苷(以前称“糖甙”),是糖分子半缩醛羟基与醇化合物发生反应失去一 个水分子,生成的具有缩醛结构的衍生物,它具有原来糖分子的环形结构,但在 特殊情况下也可生成具有开链结构的缩醛。糖苷分子中的非糖部分称为配基 (aglycone),配基的原化合物称为配糖体。W配基的不同,有烷基糖苷、芳番基 糖苷、双萜糖苷及三萜糖苷等。根据糖分子的不同,又有葡萄糖苷、鼠李糖苷 等。广泛存在于各种动植物体内的天然糖苷种类繁多,一般都具有复杂的配基。 植物的叶、皮和种子中存在数玲众多的糖苷,它们对植物的生长有重要的作用。
为确定变性酵母嗦吗甜能否在体外折奋成甜味构型,先对已被还原的变性植 物嗦吗甜进行折叠复性预备试验。植物嗦吗甜分子中有8个二硫键(图5-1), 因此稳定性很好,但同时也使其还原和复性都很闲难。Ellman’s试剂[5, 5# - dilhiohis - (2 - nitrobenzoic acid)]的二硫键还原过验证实了植物味吗甜的二硫 键对还原作用很稳定:2个稳定的二硫键需在37弋、PH9、8moI/L尿素中经 50mm?l/L (3 -巯基乙醉作用2h才能完全被还原。
表2 -47 L-冬氨酜-D-丙氨醉酯及-D -丝氨酵酯化合物的结构与甜表2 -48对Searie公司的D -丙氨酸丙酯和两种相关的Ariyoshi化合物作了 比较,它们的“下面”基团大小相似。往D-丙氨酸酯中引入次甲基会使甜度 下降为原来的1/10,但在引入次甲基的同时反转酯基团的构象,则甜度仅下降 50%。这可能是由于构象的变化而引起甜度差异。
(三)转化条件的优化
此法美国Abbott Laboratories对此做过研究。反应路线短,原料易得,但反 应条件苛刻,且需昂贵的钌催化剂。
Guan等已将与谷胱甘肽S -转移酶融合的蜇组Brazzein在酵母S. cerevisiae中 表达。Izawa等通过Fmoc策略,用固相肽合成法合成了 Bragin。此法所得的 Brazzein是蔗糖甜度的500倍,且和天然Brazzein —样可引起甜味反应。Brazzein
后来,AntondU Paladino等人还对奇异果素二聚物进行了分子动力学模拟, 其结果表明,甜味蛋白通过其碱性表面与甜味受体的带电的空穴的相互作用来产 生活性,这和之前所提的一个假设一致。
莫奈林娃从D. cumminsii的浆果果肉中提取出的甜味蛋白一般用水法抽提, 抽提液经离心分离、超滤浓缩后用离子交换色谱法提纯楮制,再经超滤脱盐后冷 冻干燥。起初,1kg浆果只能获得100?150mg的莫奈林,现在的提取得率已提 髙至3~5g。大批量处理时,可使用分批吸附法。先将水抽提液与分散在 0.02nu,l/L醋酸铵缓冲液(PH5.0)的吸附剂CM - Sephadex C25淤浆混合,接 着用水反复冲洗淤浆达到纯化的目的,然后用0.02mol/L NaCl溶液将吸附在 Sephadex上的莫奈林洗脱下来,超滤浓缩后冷冻干燥。这样分离得到的莫奈林, 若在离子交換色谱柱上分别用NaCl浓度呈梯度上升的PH7. 6和PH8. 2缓冲液进 行洗脱,还可进一步分级成5种纯组分,依次称为莫奈林I ~V,其中最主要的 是莫奈林IV。