南澳县甜菊糖苷
在嗦吗甜I、A、B基因的y端，加上3-磷酸甘油活化酶（PGK)启动子， 在3'端加上PGK终止子作为转录终点和多聚腺苻酸信号。将嗦吗甜基因试剂盒， 克隆至及co/i-酵母间的运送载体，质粒pJDB209。由于嗦吗甜基因在￡：.?>/〖和 酵母中都能复制，因此既能在中对基闽进行操纵，又能在酵母中对基闪进 行功能测试。但质粒PJDB209含有一个leu2 - d标记，使办-异丙基苹果酸酯脱 氢酶在酵母中的表达水平较低^将带嗦吗甜基因的质粒转移至突变株中， 这样由于约每200个酵母细胞完成一个突变，因此嗦吗甜基因试剂盒利用 率也提髙了约200倍，基因表达水平也相应提高。
四、利用环糊精葡糖基转移酶改性甜菊苷
天然提取的仙茅蛋白有甜味。lOjunoiyL仙茅蛋白的甜度与0.2moI/L蔗糖 相当，即其甜度是等量蔗糖的550倍。仙茅蛋白还具有将酸味变成甜味的特 性。在嘴里含仙茅蛋白3min，其甜味消失后，用柠檬酸或维生素C都能诱导 出强烈的甜味。lOpimol/L仙茅蛋白经0. 1?20.0mmol/L的柠檬酸诱导产生相 当于0.35mol/L蔗糖的甜度，甜味可以持续lOmin。它和奇异果素不同，其甜 味消失后，喝水也能产生甜味，如口含lOjxmoL/L仙茅蛋白后，由水产生的甜 度与0.2m?l/L蔗糖的甜度相当，甜味能持续约5min。这说明某些唾液中的物 质抑制了仙茅蛋白的甜味，去除这些物质后可使甜味冋复。NaCI溶液与水类 似，0.5nu>l/L的NaCI也能诱导甜味，而lnmiol/L的（：8(：12或MgCl2不能使仙茅 蛋白恢复甜味。由于唾液中含有lmm0L/LCa2+，因此有可能唾液中Ca2<和/或 Mg2+抑制了仙茅蛋白的甜味，而水可以去除唾液中的CaCl2,从而恢复了它的 甜味。
L -天冬氨酸若以嘴睡烷酮的形式与D -丙氨酰胺进行缩合，则在DMF ( 二 甲基甲酰胺）和I.-天冬氨酸的混合物中缓慢加入六氟丙酮，使悬浮在DMF中 的L-天冬氨酸完全溶解。六氟丙酮和水生成的水合物在真空条件下去除，得到 的油状物质溶解在THF (四氢呋喃）中，并缓慢加入D-丙氨酰胺在室温下反 应12h。在反应过程中，六氟丙酮在真空条件下会不断从反应液中流失，部分与 水结合的六氟丙酮水合物可以通过浓硫酸脱水后再除去。以这种方式得到的阿力
1967年，IC Clauss和H. Jensen在进行乙炔与氟磺异铽酸盐的反应时，意外 地发现了一种环状结构的化合物一~5，6 - 二甲基-1，2，3 -氧硫氮杂 环-4 (3H) -2，2-二氧化物带有爽快的甜味。随后的深入研究发现，这类化 合物中带有甜味的甚多，其环上5、6位置h的各种不同取代基团对甜度和甜味 质量有明显的影响。所有的二氢氧硫氮杂环二氧化物，即使环上没有任何取代基 团，也带有不同程度的甜味，其中带短链烷基的化合物甜度最大。对各种不同的 二氢氧硫杂环二氧化物的味觉评价认为，环上不同的取代基闭不仅仅对其甜度而 且对其甜味的纯正性均有明显的影响（见图6-19)。
(1)未被?子化状态下的结构
0.1 -0. 4mol/L NaH2P04 (或 MES 或 Bis Tris propane)缓冲溶液中，在 pH5. 5 - 8.0、温度22~40弋的条件下反应2?48h。反应体系中的溶剂、pH、缓冲溶液 的浓度和反应温度都会影响酶的活性，但对酶的选择性的影响比较小。反应过程 中乙腈等有机溶剂的比重不能超过50%，如果超过，溶剂体系会使酶发生改性 而降低水解率。反应温度的升髙会加快反应速率，但会使反应的选择性有所降 低，反应最佳温度应控制在22-40T。
对嗦吗甜基因进行体外突变，或插人合成低聚核苷酸罝换DNA序列或在体 外诱变，得到大量突变基因。这些突变基因克隆至酵母，使其分泌嗦吗甜。大多 数这些带突变基因的质粒能使酵母分泌变异嗦吗甜，但也有些质粒中没有插人使 嗦吗甜分泌的DNA序列，也没有能使嗦吗甜发生折番复性的突变。
