凤县蔗糖素
图5 - 19 在非选择性培养箪培养50代后各转化体产物的SDS - PAGE图 注：箭头所指为单链莫奈林分子位
出邻亚磺酸苯甲酸屮酯，约lh后用H 酸测试反应终点应褪色。然后加人甲 苯，通氣气氧化，以2%联苯胺乙醉溶 液测试显深墨绿色为终点，静罝分层， 有机层为邻甲酸中酯苯磺酰氣平苯溶 液（简称磺酰氣）。依次将磺酰氣和水 加人胺化锅，在丨0尤时加氨水胺化， 温度可达70T，PH9以上，静置后取 下层铵盐液为邻甲酰苯磺酰亚胺铵溶 液（简称胺化液）。将胺化液放入酸碱 化锅内，加人甲苯和30%的盐酸到pH 为1，酸析后降温至20T.，取甲苯层 水洗去氣化铵得不溶性糖精甲苯溶液。 将此溶液加热，加入碳酸氢钠中和， 调PH至3.8 -4.0,静置后取水层， 加活性炭脱色、过滤，调滤液pH至 7，在70 ~ 75弋减压.浓缩，趁热过滤， 滤液经结晶、干燥得糖精钠。
果实采摘后运往集中处理场所，经挑选、分级、冲洗、脱皮和速冻后运至各 加工厂，而加工前这些果实首先冷藏于冷库中。关于它的提纯方法，人们已花费了 近10年的时间，终于形成了现有的复杂T.艺。当然，X.体的加工工艺与加T设备 均属专利范围，为专利所有者所掌握。Tate & Syle公司使用柠檬酸钠从果实中提 取，冉经离子交换、超滤、真空或冷冻干燥等丁.序，制得白色粉末状嗦吗甜。
一、阿力甜的化学结构与甜味特性
在曰本，人们将嗦吗甜添加于冰淇淋及冰冻乳制品（包料冰棍）中。当添加 人同时具有咖啡风味的乳制品中时，嗦吗甜能使产品的咖啡风味和牛奶香味都得以 增强。需经喷雾十燥的乳制品，干燥前添加些嗦吗甜，有助于消除产品的腥味。
图4 - 34 蔗糖浓度对S. mulans依附作用的影响 一?一S. muian^P 15 一 -A- - S. miiiam5608 - -Q- - S. miilanjl89S —O一S. mulans ZAHT —A一5. mutans SB25 - -5. mutans SL - 1 -? ? - 5. muions NS - XIII
也可以通过烟草表达莫奈林。首先合成了由噬菡体PI Cre重组酶介导的特异 ?组位点丨OXP的序列，构建了两个loxP同向重复的棺物表达栽体pGLX121. 1。 PCR定点突变了 CaMV 35S启动子元件中kozak序列，使kozak中的翻译起始密码 子ATG位于Ncol位点上。把spm基因克隆到表达载体pG〖MA的Ncol和PstI之 间，给甜蛋白8pm基因加上35S启动子和polyA及NOS终止子元件，然后克隆到 PGLX121. 1的EcoRI位点上，用农杆菌LBA4404转化烟草，获得卡那痗素抗性转 基因植株，经过PCR及southern分析，证明甜蛋白spm基因已整合到烟荩基因组 内。用转基因烟草的总RNA通过RT-PCR反转录扩增spm基因，证明了在35S启 动子及其他调控元件的控制下，spm基因在转基W烟草中转录表达出mRNA。提取 转基因烟草总蛋白，经SDS-PAGE分析，初步证明了 8pm基因在转基因烟草中表 达出目的甜蛋白。
筛选具有水解TCR活力的微生物，通常要经过如下3个步骤。①将微生物置于以棉籽糖为惟一碳源的培养基中进行富集培养。②用超声波破碎微生物细胞，并以对硝基苯-a-D-半乳糖苷为底物对微 生物进行活力测试。那些确定具有对硝基苯-a-D -半乳糖苷活性的微生物， 再进一步检测其水解棉籽糖为半乳糖和蔗糖的能力③对具有水解棉籽糖沽力的微生物再用TCR进行筛选，以确定其水解TCR 的a-半乳糖苷酶活力。 <
六、甜菊苷的应用
