城厢区异麦芽酮糖
重组Neoculin的N端被糖基化了，它与植物中的Neoculin十分相似。尽管 重组Neoculin的N端附着有三乙酸基氨，但它和植物Neoculin —样具有甜味和 很强的甜味诱导作用。
四、甜菊双糖伴的安全毒理学分析
(二）酶反应过程的动力学模型该合成反应中，甜菊苷与蔗糖经FFase催化生成FSte和葡萄糖。该反应双底 物、双产物，并且同时有副反应发生，反应机制相当复杂。Chamber!等认为，蔗 糖和呋喃果聚糖的转果糖基反应，符合乒乓（BiBi)机制。Suzuki等认为，S和蔗 糖的转果糖基反应也符合相同的机制（图4-21)，并对该反应建立了动力学模型。 该反应中，游离爾E和蔗糖Sue反应形成第一个复合物E ? Sue。然后G从E ? Sue 释放形成第2个复合物E ? Fru，该复合物与S反应形成第3个复合物E ? FSte，随 后FSte释放。在该系统除转果糖基作用外，还同时进行蔗糖水解和FSte水解反应。 这些水解反应若把水看作第二底物，则也符合乒乓（BiBi)机制，如图4-21 (2) 和（3)所示。根据研究认为FSte的合成不仅受到G的抑制，还受到F的抑制， 因此必须考虑G和F的竞争性抑制作用，并认为酶和副产物的复合物E ? Glu和 E* Fru呈惰性。FSte合成的总反应的理论机制如图4-22所示，A,?屺分别表示一 级反应的速率常数。图4-21各反应的乒乓（BiBi)机制示意图 (1) FSte合成反应 <2>蔗糖水解反哚 (3) FSte水解反应
要在酵母中表达嗦吗甜，首先要合成相应的基因。为使基因能在酵母中高效 表达，采用酵母优选密码子合成嗦吗甜I基因，为便于操纵DNA序列，在嗦吗 甜基因设计时在序列中包含多个限制性酶切点。嗦吗甜I基因长度为630bP,它 的DNA序列的5'端和1端分别为Bel I位点和Xho I位点。嗦吗甜I合成基因经 直接定点突变或DNA片段替换合成嗦吗甜A、B基因。将嗦吗甜I基因113位 的天冬酰胺的密码子替换为天冬氨酸的密码子即得嗦吗甜A基因序列，随后将 嗦吗甜A基因46位的天冬酰胺的密码子替换为赖氨酸的密码子即得到嗦吗甜B 基因。
由于甜味剂和甜味蛋白之间在大小上存在着巨大的差异，因此，研究人员认 为，甜味蛋白所作用的受体有别于低分子质量甜味剂的。尽管对活性位点的间接 研究早已表明了甜味蛋白受体存在的可能性，可事实上，这些受体一直到近几年 才得到确定和分析。
在一定程度上，在狗身上进行的试验结果比较简单。已知至少有某些猴 子具有转变甜蜜素成环己胺的能力。Seiber等人对此进行了很长时间的研
首先，制备乙酰乙酰胺磺酸三乙胺盐。将4.85g (0. 050mol)氨基磺
3.5-5.5, a = 10，Z - Asp 和 PheOMe 分別为 80mmol/L、240mmol/L 时，Ym^ 接近100%，该结果在实验允许误差范围内与理论值吻合
与【41蛋白有髙度同源性的109个氨基酸的多肽基W的阅读框架在与 RIM-C基因探针杂交的IX:域中。阅读框架中的起始密码子后即可能是367bP内 含子，据报道这是W1蛋白基因的一个特征。该内含子5,端和3,端的接合序列 分别为GTATGT和TAG，内部保守序列TACTAACA位于内含子3’端上游的31个 核苷酸。大多数核糖体蛋白质基因的上游区域布两个保守序列：H0- M0L1和RPG盒，RPG盒序列为ACACCCATACA (C/T) (A/T)。分离所得基因 在V上游有两个序列与RPG盒相近，序列一为ACACCCACCCACG (13个核苷酸 中10个相同），位于-197 ~ -179;序列二为ACACGCATACAAA (13个核苷酸 中丨1个相同），在非编码链上的-151 ~ -139。
糖其余游离羟基活性被钝化，而最活泼的c-6羟基此时尚有反应活性。此时， 利用乙酸酐对C-6进行酯化，从而实现了单基团保护。但因为化学反应没有专 一性，故反应产物仍很复杂，只能得到以C-6单酯化为主（50%左右）的混合 物，故此时需要高效的色谱分离手段加以精制处理。
