阳信县蔗糖素
由于三氣蔗糖的物化性质和甜味特性比较接近蔗糖，因此可在很多食品中代 替蔗糖，表3-10列出了可应用三氣蔗糖的食品范围。
B链的Asp残基被Asn替换后分别得到[ASnKl ]-莫奈林和[ASnw ]-莫 奈林的类似物，它们的甜度分别是蔗糖的7000倍和20倍，而用Abu替换Asp117 得到的类似物[Abi^]-莫奈林完全没有甜味。这表明：位于《-螺旋内的 Asp821被Asn替换后，可能会引起莫奈林分子构象的微小变化，或者更有利于结 合受体；ASpOT位于莫奈林分子内a-螺旋的起始部位，在分子的表面有游离的 办-竣基，能以离子键的形式与受体相结合，可能是莫奈林的活性部位； [Asnm]-莫奈林之所以也具有部分甜味，可能是Asn87与受体以氢键的形式相结 合的结果。此外，还对英奈林仅有的一个CySw的作用进行研究，结果发现：用 Ser替换Cy8w后，得到的[Ser8^ ]-莫奈林类似物的甜度是蔗糖甜度的2000 倍，并且该类似物在水溶液中的稳定性明显下降，与人工合成的莫奈林的构象略 有不同。可以肯定，Cys残基上的一SH基团在保持莫奈林的天然甜味构象方面 起着重要的作用。
表2 - 33所示为纽甜在一些典型应用中的一般用萤水平。由于在酸性pH范
SDS - PAGE和Western印迹分析。结果表明，重组奇异果素通过SDS - PAGE处理 后具有和植物奇异果素?样的迁移率，并且它也和植物奇异果素一样地被糖甚化 了。转基因莴苣中的奇异果素含谊为33.7~43.4叫5/8鲜重。重组奇异果素具有和 植物奇异果素相似的强甜味诱导作用。但是，与多数转基闪植物的情况一样，这种 转基因窝苣在后代的表达水平并不稳定，宽组奇异果素的产量要明显降低。
加入16. 8g碳酸氢钠（0.2mol)，于50T下恒温lh。反应混合物抽真空以去 除/V-甲基吗啉、水和二甲基甲酰胺。剩余物溶解于40mL乙酸酐（0.41mol) 后，加人6. 5g乙酸钾作为催化剂（0.066mol),加热到105-UCTC,恒温反应 2.0~3.5h。稍微冷却后，将反应混合液倒人冰水中，其间需不停搅拌。过滤沉 淀并用水洗涤，得到的固体在真空50弋干燥至恒重，加人丙酮-甲醇（1:9)罝 于Ot，经过滤、洗涤、干燥、重结晶等处理，得到白色晶体产物，为6，广， 6、三氧-三苯甲基-五乙酰基蔗糖（TRISPA)。
(三）Neoculin与甘露醇结合植物凝集棄的结构比较
甜蛋白最初均从植物直接提取，但这种生产方式有较多不足之处。利用基因 工程生产甜蛋白不受季节、产地等影响，是一种很宥前途的生产方法。目前这方 面的研究相当活跃，除嗦吗甜、莫奈林这方而的研究成果显著外，其他甜蛋白利 用基因工程生产也在进行中。如美国Nek丨ar Worldwide公司已将Brazzein表达至 玉米中，丨t转基因玉米中能提取lkgBmzzein。美国生物资源国际公司正研究通 过种植和转基因方法生产Miraculin。据报道，H本Asahi Denka Kogyo公司和生 化研究所已将Curculin在转基因植物和大肠杆菌中表达。
在上述试验中，单酯化和氣化反应中分别采用吡啶和DMF为溶剂，假 如这两步反应都使用DMF,便可合并两步反应于一步进行，这样就可简化制 备路线。以DMF代替吡啶作为单酯化反应的惰性溶剂，与吡啶作单酯化反 应溶剂进行比较，结果发现，无论以吡啶或是DMF作酯化试剂，其终产品 得率相当。
单基团保护法的核心在于蔗糖(:-6位羟基的保护，以避免该位置在随后的 氣化反应中引人氯原子带来苦味，该步骤也是以下各步反应的基础和影响终产物 得率的关键所在。这种选择性保护需要相当严格的反应条件，同时还需要有效的 分离设备，因此，蔗糖C-6位羟基的单基团保护，成为整个合成过程中对反应 条件和分离条件要求最严格的步骤。已知蔗糖具有醇的典型反应，其8个羟基的 相对活性顺序大体为V >6 >4 > r >2 >3 >3# >4'，这些羟基的反应活性不仅受 空间排列的影响，也受反应性质、反应条件（温度、溶剂、时间、反应物浓度 等）、试剂性质与活化络合物稳定性等多方面的影响。尽管各羟基（尤其是同级 羟基）之间所处的位置及活性差异不大，但只要严格控制反应条件，仍然有可 能选择性地合成部分取代的蔗糖衍生物并使某种特定的产物处于优势地位。
投人大工业生产最有效的途径仍是微生物发酵生产。近年来科学家们对真核 基W在原核中表达产物的功能进行了充分研究，认为有些基因产物尽管加工过程 不完善，只要给予合适的体外环境，它们可以重折叠成具备真核基因功能的三维 构象，从而恢复功能活性。因此选择合适的表达载体和摸索合适的体外条件去形 成有完全或部分活性的功能蛋白仍是一项有吸引力的工作。
