科尔沁区蔗糖素
三、甜蜜素的安全毒理学分析
(-)甜味受体的发现
阿斯巴甜的合成原料有2种：L-天冬氨酸（L-Asp)和L-苯内‘氨酸 (L-Phe)。这2种氨基?酸分子中的功能闭较多，若不对部分基团进行保护，在 缩合反应时会出现自身酰化和交叉酰化，生成6种二肽混合物，它们分别是： a - Asp - Asp、(3 - Asp - Asp、PheOMe - PheOMe、a - Asp - PheOMe、jS 一 Asp - PheOMe和PheOMe - Asp。为减少副反应，在2种氨基酸缩合之前需对某些功能 基团进行保护，缩合后再将之脱除。
由于甜受体是由一定顺序的氨基酸组成的蛋白质，因此有较严格的空间专一 性要求，极性强、带刚性骨架部位要求尤为严格，而极性弱、带挠性骨架部位则 有一定的伸缩余地。
图4 -11所示为在非均匀酶反应体系中，环糊精葡糖基转移酶为100 ~ 1500U/g
m [127]的甜度是蔴糖的58倍，但令人难以理解的是，反式-2-甲基环己基 酯及其他酯并没冇甜味。D, L-Ama-DL-Ama-OMe的金刚烷基酯[丨28]具 有很高的甜度。
蔗糖浓皮/%
采用电穿孔法，将质粒转至产朊假丝酵母(Candida ulUis)中。该方法较简 单并能实现Candida utUis的高效转化。对转化条件进行优化以达到最优转化率。 据研究，酵母在最优电脉冲转化率下存活率为50% -70% ,因此通过调整场强、 内阻和电容大小，使Candida utUis的存活率达10%?70%。在加了4(Vg/mL CYH的YPD平板培养基上培养C— ulUis转化体（4(Vg/mL CYH是野生塑 Candida ulilis能在YPD培养基生长的最高浓度），进行CYH抗性转化体选择。 YPD培养基组成为：2%葡萄糖、l%BaCto酵母抽提物、2%Bacto蛋白胨。由于 电脉冲导致酵母细胞膜的破裂，使细胞对渗透压更敏感，因此电脉冲处理后细胞 立即在YPD培养基上培养不形成菌落D电脉冲处理后细胞立即分散在选择性培 养基，也不能得到CYH抗性菌落，需在30弋含lmol/L山梨糖醉的YPD培养基 上预培养一段时间后，再转移至含CYH的培养基才能得到转化子。
人们通过合成呋喃果糖环上带有4 -氣取代基的蔗糖衍生物來进行甜味评 价。1983年，Githrie等人最先提出由蔗糖与三苯基膦-二乙醉偶氮二羧酸化合 物的新反应可制得3', 4'-来苏糖基-环氧化物，这已应用在4，1\ 6,-三 氣-4，r, 6^-三脱氧-半乳糖基-蔗糖的合成上。来苏糖基-环氧化物在 C-4位上能专一地打开，使得氣阴离子亲核基团接上，再复原成果糖构型，专 一生成了所需的4，r, 4\ 6,-四氣化物（图3-49),它比蔴糖甜2200倍。同 样，用氣转代V-羟基，可进一步使Sucmlose的甜度增大4倍。很明显，所有 的氣取代基均在分子的上方，因为相应在C-3\ C-4'位上构象相反的山梨糖 -四氣化物其甜度只有蔗糖的200倍。这种山梨糖-四氣化物的合成是在3,，4f -核糖-环氧化物的C -4'位上专一地接上氣阴离子（图3 -49〉。
