防城区三氯蔗糖
果浆中的仙茅蛋白不能用水抽提，因此经反复水洗可去除大萤水溶性物质, 然后可以用O.5rnol/L NaCI提取，这样就能明显提高仙茅蛋白的纯化倍数。 0.5mOI/LNaCl提取的提取液无色有甜味，然后经硫酸铵分级，再经CM-Sepha- _柱分离，NaCI线性洗脱后主要成分对应一个尖峰，该峰组分有甜味。加硫 酸铵至约饱和度的80%，得到的沉淀在lOrmnol/L磷酸缓冲溶液中溶解，溶液进 行Sepha(丨exG-100柱凝胶过滤纯化。这样从30g果浆（湿取）可以得到5mg纯 仙茅蛋白（表5-19)，得到仙茅蛋白纯度很高，不溶于去离子水，溶于盐溶液 中，等电点7.1。
图2 -54 在2年的毐性实验期间雄性和雌性大賦的体里变化在用纽甜所做的蜇要安全性试验中，并没有发现动物的临床病理指标、发病 率、死亡率的改变，或确定的器官毒性的表现。纽甜毐性试验时，所观察到关于 试验动物体里降低、体歌增长减慢是因为食物的可口性降低导致摄入减少所造成 的，并不是纽甜毒性作用的结果。
巨大芽孢杆菌(B.megalerium) NC1B 8508可以将葡萄糖发酵为G - 6 - a。 当巨大芽孢杆菌（B. megaterium) NCIB 8508在由0.4%葡萄糖和Duff & Wehley 盐介质组成的培养基中于30尤摇瓶培养时，即可专一地分泌出G-6-a,而不形 成多乙酰化葡萄糖酯。
二肽甜味剂对/V-端结构有严格的要求，C-端却是经常可以变化的。苯丙 氨酸可在环上被取代，如可用L-蛋氨酸或L-酪氨酸替换苯丙氨酸，但这样会 损失一部分甜味。除了正位的一种-OMe衍生物外，用高级同系物替代酯基团 虽仍有甜味，但甜味随分子质谊的增加而减弱。表2-40总结了这方面早期的研 究情况。表 2-40早期有关阿斯巴甜化学结构的改进研究注：①所给数佰是相对于蔗糖甜度的倍数，下同。
(三）其他毒理学分析
0-CH3和受体侧链N-端第四个氨基酸残基形成的色散键，因此与〒氣蔗糖相 比，4’-0-甲基三氣蔗糖只是甜度发生适度降低。
由于莫奈林的A链N端与B链C端非常靠近，因此研究人员利用基因工程 技术生产共价的连接单链莫奈林。单链贷奈林有两种类型：SCM和MNE1。SCM 是通过直接把B链C端的Ghi50连接到A链N端的Argl而得，它由94个氨基 酸残基组成。MNE丨则是通过Gly-Phe 二肽连接B链和A链而得，由96个氨基 酸残基组成。利用这些合成的基因，研究人员已经实现在不同的宿主细胞（大 肠杆菌、酵母等）中表达和生产奠奈林。
大多数转化体培养72h时嗦吗甜产率达到最高，72h后产率明显下降（图 5-8)。但双转化体TB2bl-44-GD5的产率在72h后仍继续增加，这是由于它 的gdhA启动子与生长期同步表达，而酯酶B2启动子在生长期结束后表达，因 此当晚表达的启动子（如次级代谢的启动子）也能被Aauwnori转录机制识别 时，将一早一晚表达的启动子结合也许就吋以延长基因的表达时间。TGDTh-4 以硫酸铵为氮源培养48h时嗦吗甜分泌量达到最髙，这是因为它采用的 A. awamori的gdhA启动子通常较早表达。
