成武县木糖醇
在非选择性培养基上培养转化细胞，在起始培养时各转化体的莫奈林表
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
合成这两种糖的单甲基醚衍生物并品尝，发现在2、3、4或6位置上进行的 甲基取代对甜味均不发生任何影响。综合这些试验和那些脱氧糖试验的结果，可 以确定第3位罝构成ShaHenberger AH、B系统中的B，第4羟基构成AH，第2 羟基构成AH的可能性要小些。因此，吡喃葡萄糖中AH、B系统是位于分子中 比较活泼、很少受干扰的那个部位，它既不包含空间活泼的伯醇基也不包含异构 体中央的端基。
图5 - 15 莫奈林表达盒构建
{二）低温混合物的形成
第二节蔗糖衍生物的进展本书第一章巳对甜味剂理论做r详细讨论，本节在此基础上对蔗糖的化学改 性以期寻求更理想甜味衍生物的研究进展做一系统论述，首先从蔗糖的甜味理论 开始讨论。
组成二掩键的半胱氨酸残基和连接于NAS的A8n81的糖分子用球棍模麽表尔〉
五、阿力甜的应用
Morini等人推测的可以结合“A型部位”的四种化合物——糖楮、阿力甜、 阿斯巴甜和6 - Cl - D -色氨酸中，至少有3种可与其他甜味化合物发生增效作 用。这表明，在单一亚基上的结合足以使受体活化，而在第二个亚基上结合配体 则可以强化反应。关键的一点是只有在两种甜味剂都是小分子甜味剂或一个为大 分子甜味剂和另一个为小分子甜味剂的情况下，才能观察到增效作用。倘若两个 都是大的非蛋由甜味剂的情况下，那么就不能观察到增效作用。
