越西县乳糖醇
安赛蜜在水溶液中的稳定性取决于pH和温度,在食品和饮料中的最佳pH 范闱3~7。在正常情况下安赛密溶液的浓度差超过5%时,就能尝出甜味的差 异。如发觉甜味有差别时,就可预计到5%的浓度差已开始产生了。pH为3的 产品在室温储存几年后,其中的安赛密才有5%的损失,这已大大地超过规定的 储存期,随着pH的升髙,货架期的稳定性也进一步改进。在PH7.5的缓冲液 中,室温中储存10年后,安赛蜜含萤仍为99%,这就证明存放10年的安赛蜜 含谊在统计上没有显著的损失。
在各种致突变试验研究中,包括强致死试验、微核试验(micronucleus test)、伢髄试验、恶性转移试验、DNA结合试验等,均未发现安赛蜜有任何致 突变现象。用白鼠进行繁殖试验,表明安赛蜜对试验动物的生育能力、每窝小动 物总数、动物体苽、生长情况和死亡率等均没任何影响。
在嗦吗甜I、A、B基因的y端,加上3-磷酸甘油活化酶(PGK)启动子, 在3'端加上PGK终止子作为转录终点和多聚腺苻酸信号。将嗦吗甜基因试剂盒, 克隆至及co/i-酵母间的运送载体,质粒pJDB209。由于嗦吗甜基因在£:.?>/〖和 酵母中都能复制,因此既能在中对基闽进行操纵,又能在酵母中对基闪进 行功能测试。但质粒PJDB209含有一个leu2 - d标记,使办-异丙基苹果酸酯脱 氢酶在酵母中的表达水平较低^将带嗦吗甜基因的质粒转移至突变株中, 这样由于约每200个酵母细胞完成一个突变,因此嗦吗甜基因试剂盒利用 率也提髙了约200倍,基因表达水平也相应提高。
Kondo等人曾尝试构建一 SCM质粒并在C— idilis中生产SCM。他们把 SCM基因插入由产脘假丝酵母(C. utUis)克隆来的GAP基因的启动子和终止子 片段之间。通过这种方式,他们获得了高产虽的SCM,表达水平高于总可溶性 蛋白的50%。他们还尝试克降带S. cerevisiae GAPDH启动子的SCM基因用来生 产SCM。然而,所得的产最水平很低,仅为总可溶性蛋白的5%左右。美国一专 利公开了利用P. pastoris生产SCM的方法。首先将合成的SCM基因克隆于含有 S. cerevisiae a -因子分泌信号和GAPDH启动子的PGAPZa -载体,然后将构建的 质粒转化成P.P^tori5GS115,最后通过菌株对Zcocin的阻抗性,对转化株进行 筛选。观察发现所分泌的.1:组英奈林为一条12kji的带。SDS - PAGE分析表明, 通过该方法可获得约10g/L的SCM。这些SCM经纯化后可引起甜味。
后来,由于甜蜜岽在各种食品、饮料中得到广泛的应用,美国其他几家公司 也开始生产,其中包括Pillsbnry公司、Pfizer Inc公司、美国甜密素股份有限公司 和Miles实验室等。在1970年禁用前,东亚的FJ本、韩国和我国台湾省也有 生产。
2-90 (3)]中,其构象中的丨)区域与前两种相比空出许多,但其甜味只有蔗糖 的3000倍。由此推断,D区域(图2-91)的填充比例与二肽甜味剂的甜度密 切相关。
Bmzzein在氨基酸分子序列和蛋白质空间结构上与其他已知序列结构的甜蛋 白无同源性和类似性,其二级结构类似于植物抗菌蛋白y-硫素(y-丨hionins)、 防御素(defcnsins)和节肢动物神经毒素 (neurotoxins) 0由氨基酸序列预测表明,其 二级折吞构型与丝氨酸蛋白酶抑制剂结构相 似。
达水平没有区别。但是在rDNAK整合的质粒转化体,在非选择性培养基上 培养50代后,莫奈林产量明显下降,而整合点在UKA3区的质粒的转化体 中没有明显下降,见图5-19。不带萸奈林表达盒的载体一直都保持稳定, 这说明莫奈林的高产可能会导致在rDNA区粮合载体稳定性的显著下降。且 培养50代后,pUMll转化体对CYH (4(Vg/inL)保留抗性的细胞数占总细 胞数的80% -100%, pCLRM216和pRM丨丨转化体为0% ~ 30%。这些结果 表明URA3区是在C. utilis中最优多拷贝整合点。URA3栽体除能维持载体序 列稳定外,它还在转化前去除了细菌序列,这对于食品工业蛋白质生产是很 有益的。