通海县麦芽糖
进行心电图检查，动物尸检以及对关键试验中的所有动物组织进行品微镜检査。亚 慢性试验（13周）显示，即使在很大的剂萤范围内[大鼠Sg/Xkg.d),小鼠8# (kg*d)，狗1.2g/(kg ?(!)],动物对纽甜均有很好的耐受性，纽甜没有呈现出靶 器官的毒性，更没有造成与纽甜相关的死亡以及外观和行为的改变。上述剂量分别 超过了狗、大鼠和小鼠的最大耐受剂量，因此没有在这些动物身上做长期试验。
本研究用二甲基甲酰胺（DMF)和氣化亚砜制备Vilsmeier试剂，此反应为 放热反应。将8.4mLDMF预冷至0T，加入8.5mL氣化亚砜，搅拌反应30min， 温度控制在50弋以下。反应结束后加人lOOmL DMF，将混合液冷却至Ot,在 20T：以下缓慢加入15g6-PAS (Vilsmeiei?试剂：6-PAS =4:1),在0弋下保持 15min0慢慢升温至70T,通人氮气来赶走部分HC1，此温度下维持30min后再 逐渐升温至100?12(rC，恒温反应3~5h,趁热以活性炭脱色，浓缩滤液，冷却 后有晶体析出。待结晶完全后过滤，用无水乙醉重结晶，得到白色针状晶体，为 4，丨\ 6'-三氣-4,丨\ 6、三脱氧-2, 3, 6，3\ V-五乙酸半乳蔗糖醋 (TOSPA)。
对转化体的胞内嗦吗甜含量测定后，发现在高产菌株中有较大一部分嗦吗甜 留在胞内。产率最高的菌株，胞内嗦吗甜含量约占总胞内蛋白的3%,且胞内嗦 吗甜也发生了部分降解。但在低产菌中胞内的嗦吗甜含量很低，这说明 A. awamori分泌系统?能已经超负荷，这就限制了嗦吗甜的产率。
由于酵母宿主中内源有对CYH敏感的L41基因，因此细胞中需有多个该标 记基因（3 ~ 10拷贝/细胞）以选择CYH抗性转化体。为增加每细胞中整合载体 的数目，通过从5#端缺失CYH抗性基因的启动子区域构建启动子缺失的CYH抗 性基因的质粒[图5-13 (1)]。该质粒在rDNA片段处线性化后转化至 尽管在亲代质粒PCLRE2 (图5-14)和pCLREll间没有显著的转化率差别，但 进一步的缺失会降低转化率。pCLRE15和pCLRE16的转化率约是pCLRE2的 15%，pCLRE17约是pCLRE2的0. 3%，PCLRFJ8则没有产生转化体。以丨41基 W在每细胞中的拷贝数为2计，经估计拷贝数最多的PCLRFJ7的拷贝数达到每
Birch及其同事通过对单糖和二糖进行化学改性，主要娃通过醚化、酯化或 取代一个至数个羟基团等方法，来探寻分子中包含在生甜团内的羟基，并命名为 X/AH/B系统。对于葡萄糖分子来说，首先可以排除最基本的6-羟基和1 -羟 基团，因为甲基-D-吡喃木糖苷具有甜味。4，6-0-甲基和甲基《-D-吡喃 葡萄糖苷衍生物不具有甜味，因而也排除了 2，3-乙二醉[邻位倾斜（偏转） 羟基]，这样就只有3 -和4 -羟基才有可能构成AH和B单元。通过考察3 -羟 基取代的吡喃匍萄糖苷和木糖苷分子结构，可知3-羟基为B基团。蔗糖分子中 的某些羟基对甜味当然有作用，因此人们选用很多方法来掩盖、改变或替代蔗糖 分子中各个专一的羟基，利用生成的各种衍生物就能研究蔗糖甜味与结构的 关系。
第一节三氯蔗糖
3-18所示，测定20g 4 - PAS分别与含2%、4%、6%、8%、10%乙酸的 lOOmL甲基异丁基酮回流3、3.5、4h的得率，以确定最佳乙酸浓度与反应时间。 由图可见，当在8mL乙酸/lOOmL溶液中反应3h,得率可达73.2%。另夕卜，
另外的结合部位
(一）嗦吗甜基因的合成
