华阴市爱德万甜
注：①相当于2茶匙蔗糖的甜度。 ②冲泡后所得饮枓的最后浓度。
(二）质粒构建
酵母（BB25-UO 30*t. 72h
0.636nm、B …X=0.735nm。如果以 3,-OH ( AHS) /2 - 0 (Bs)为 AH/B 对, 甜味分子的0-3,…0-2…Cl-4,距离AH…B分别为0.484nm和0.406nm,距 离太远。但是甜味分子（少=82.5°,少=丨3.8°)的0-3,…0-2…C卜4,能够 满足AH、B、X甜味三角理论（果聚糖衍生物AH…B =0.208mn、AH…X = 0.277nm、B…X = 0.555nm，塔格糖衍生物 AH …B = 0. 231nra、AH …X = 0. 437nm、B…X =0. 627nm) 0
4，6, \\ 6'-四氣半乳糖基蔗糖是第 的碳水化合物衍生物，其甜度为蔗糖的200倍，通过三步处理法用磺酰氣对蔗糖进 行选择的氣化所得，见图3-59。在-30T的低温下，在嘧啶中用磺酰氣对蔗糖处 理，得到4, 6, 6'-三氣-衍生物。然后在-5T下使用1，3，5-三甲基苯磺酰 氣处理6d，选择性在c-r上发生取代，最后于140T下，在二甲基甲酰胺中用氣 化锂处理18h后转化为氣，即生成4，6, T, 四氣半乳糖基蔗糖。
4-8所示为Marumilon A在水溶液和5%盐溶液的相对甜度，表4-9所示为盐溶 液浓度变化对Marumikm A的影响。往Marumilcm 50中添加甘草甜的好处是在于 混合后两者所带有的不愉快后味均可降至不明显的程度，这样，Marumilon 50就 更接近于蔗糖了。日本将Marumilon A应用于各种食品和饮料特别是含盐食品 中，因为盐味可提高Mammilcm A的甜味，同时盐味本身也因此而明显减弱。纯 甜菊苷与甘草甜的混合物也有类似效果，但性质不及Marumikm 50好，因为前者 包含有甜菊双糖苷A。
2)两种不同大小的甜味剂与了丨拟-丁丨㈦的活性态Aoc-AB的结合[较小的甜味剂结合于闭合的 T1R2 (A)部位上，较大的甜味剂則结合于打幵的T1R3 (B)部位.且占用了 LB丨和LB2上的残基]
⑥蔗糖C -3'位上的羟基也是甜味所必需的。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
