大姚县糖精钠
表4 -17 二氢査耳酮甜味剂及其来源
第二节莫奈林
糖精在人体内不发生代谢作用，这点似乎已经很明确r。然而，最近也有数 篇文献报道发现过糖精的代谢产物，但是这钱报道发现糖精代谢物的测定方法与 步骤有些问题，令人怀疑。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
表2-31 用纽甜所做的人体安全性试验
表S-10 莫奈林的氨基酸组成 单位：个
甘茶甜素（Phylloduldn)是用酶水解法由虎±1：草科（Saxifragaceae)植物八 仙花 Hydrangea macrophylla Seringe var. thundergii ( Siebold ) Makino 叶子天然存在 的糖苷中分离出来的，它在叶子中的含最高达2. 36%。围绕着Phyllodulcin的分 离纯化，已申请了数个专利方法。有一种方法是利用甲醇或乙醇提取，通过调节 1>H及用氣仿抽提法去除色素及Hydrangenol ( Phyllodulcin的非甜同型物）等杂 质，然后用一种非极性溶剂在pHIO条件下进行选择性抽提，可得到髙纯度的 Phyllodulcin 产品。
棉籽糖水解法没有分离上的问题，所使用的《 -半乳糖tT?酶也可以很经济地 获得，并以固定化的形式使用。同时，三氣蔗糖还可以从反应溶剂中被选择性地 结晶出来，从而使反应向正方向进行，并减少回收成本。可惜的是，目前棉籽糖 还未实现工业化生产，它必须从天然糖源（如甜菜糖蜜或棉籽粉）中分离出来， 或经过半乳糖苷酶从半乳糖和蔗糖合成而得，因此无法满足工业化生产三氣 蔗糖对原料棉籽糖的需求。另一个突出的问题是，四氣化棉籽糖的水解速度很 慢，特别是要达到60% ~70%以上的水解率就需要更长的时间。因此，本方法 的经济效益尚体现不出来，目前只有理论上的研究价值。
