丽江市三氯蔗糖
过在60弋保持lOmin，然后在4t、pH4.5条件下保持lh,可得接近单一组分的 莫奈林（经SDS - PAGE测定）。通过离子交换柱可进一步纯化，得率约为 100mg/10g湿酵母（700mg可溶蛋白〉。提纯得到的萸奈林与天然莫奈林甜度一 样，阈值丨网，通过CD光谱分析比较重组莫奈林和天然莫奈林的二级结构单 元，因此可以预料两者必然有相同的三级结构。
据估计，尽管人们对糖精的安全性问题存有疑问，但美国仍有大约70万人 经常食用，包括占总人数1/3的10岁以下的小孩。在美国，大约有60%的糖精 是用在软饮料中，有20%用在其他饮料和食品，还有20%作为餐桌甜味剂加以 使用。美国FDA统计美国消耗掉的糖精总数虽每年高达3000t,以其甜度大约是 蔗糖的300倍计算，几乎有100万t的蔗糖被糖精所替代。
在C-6’位上的进一步氣化能提高甜度，制得的4，6^-三氣-4，1'，
的 des - pGlul - Brazzein 和 SNase - des - pGlul - Brazzein 融合体都没有甜味。但 有趣的是，Brazzein 抗体对 SNase - des - pGIu 1 - Brazzein 融合体和 des - pGlul - Brazzein (由CNBi■解离得到）都有反应活性。
该转糖苷反应中，底物KU浓度及反应时间对转化率的影响见表4-13、图4-20。RU浓度较低时，RU-F合成速率较高，RU的转化率（RU-F/RU)在 反应初期达到最大。RU浓度0.025nu)l/L时，反应lh,达到最大转化率88%。 RU的转化率随RU浓度上升而下降，RU浓度0.5mol/L时，反应20h,转化率 为19%。S、RU的结果类似。S浓度0.025mol/L时，反应0.5h后转化率达 到 80%。
很难说这是否是真正的第五个活性位点，或者这只是一个在不影响受体粮体 反应的情况下难以被扰动的临界区域。其他C族受体的数据表明，所有代谢型 受体的半胱氨酸贫集区域具有主要的结构作用。至于人体Ca2?受体，Hu等人发 现，hCaR的半胱氨酸富集区域在Venus flytrap结构域至hCaR的7TM的信号传 递和信息传递的序列特异性中起着关键作用。所有在这区域的突变都可能破坏甜 味受体的结构整体性。另一方面，楔形机制确实在无需提及这一另外结合部位的 情况下，为T1R3在与甜味蛋白相互作用中所起的关键作用提供了一个简明的 解释。
(三）酶法合成常用的酶制剂
这个结论不久就受到其他研究者的反驳。Heijckn等人指出C -端手性碳中 心两个R基团的大小和长度均会影响甜度，例如，用高级酯取代阿斯巴甜的甲 醋会导致甜度的下降。同样，苄基团若用其他更长的基团来替代，甜度也会下 降。在F,Dd构象中对旁链长度不存在明显的阻碍层。意大利的研究人员发现， 旁链的长度对甜味很重要。Heijden认为Fn D■构象能与甜受体发生相互作用， 它的两个R基闭均能与甜受体发生作用，但当基团太大时会阻碍分子接近甜 受体。
(二）莫奈林的甜味活性中心
